本发明属于免疫学技术领域，具体涉及一种抗猪流行性腹泻病毒S1蛋白的单克隆抗体及应用。所述的单克隆抗体重链可变区的CDR包括氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的CDR1、氨基酸序列如SEQ ID No.2所示的CDR2和氨基酸序列如SEQ ID No.3所示的CDR3；轻链可变区CDR包括氨基酸序列如SEQ ID No.4所示的CDR1、氨基酸序列如SEQ ID No.5所示的CDR2和氨基酸序列如SEQ ID No.6所示的CDR3。可以利用常规基因工程或蛋白质工程的方法获得，避免了杂交瘤细胞长期冻存抗体丢失，同样也有利于抗体在基因和蛋白水平上进行优化，进而提高抗体的特异性和亲和力。