本发明公开了动物精液冷冻保存技术领域的一种矮马精液冷冻保存的方法，包括以下步骤，步骤一、按质量比选取原材料并预处理，原材料包括糖类5.000g‑6.012g、谷氨酰胺0.030g‑0.042g、甘油4.2ml‑5.6ml、精氨酸0.012g‑0.032g、青霉素10～20万IU、庆大霉素10～20万IU、新鲜卵黄液4‑10ml和新鲜马奶50‑100ml；步骤二、制备冷冻保存稀释液；步骤三、新鲜矮马精液预处理；步骤四、冷冻精液的分装保存；通过精氨酸减少精子的氧化应激程度，提高精子的抗氧化能力，从而减少精子冷冻损伤，因此提高冷冻保存精子的活力。