本发明涉及生物技术领域，公开了一种水稻种子胚乳优势表达启动子pNFYA2、制备方法及应用，核苷酸序列如SEQ ID No:1所示，启动子pNFYA2用于驱动外源性基因在水稻种子胚乳中优势表达。本发明具有以下优点和效果：本发明通过种子胚乳优势表达启动子驱动外源基因在水稻种子中表达，从而在提高水稻产量和改善稻米品质方面具有重要的应用前景。能有效应用于种子发育过程、贮藏物质积累的基础研究中，对于禾本科作物尤其是水稻胚乳相关的研究具有重要的理论及实际意义，在农业领域具有广阔的应用和市场前景。