本发明提供一种血浆中百草枯、敌草快、草铵膦和草甘膦的检测方法，涉及临床医学检测技术领域。包括如下具体实验步骤：通过蛋白沉淀和液液反萃取对血浆样本进行前处理，使用Thermo AcclaimTrinityQ1色谱柱，通过液相色谱串联质谱法进行分析。本发明提供的检测方法，可有效对血浆中百草枯、敌草快、草铵膦和草甘膦进行同时检测，无需使用离子对试剂作为流动相，操作简便、结果准确、灵敏度高、特异性强，适用于临床中除草剂中毒患者的毒物筛查及定量检测，具有较高的临床应用价值。