本发明公开了一种大鼠阴茎海绵体脱细胞支架及水凝胶的制备方法和应用。为获取大鼠的阴茎海绵体，采用脱氧胆酸钠溶液进行脱细胞处理，再用脱氧核糖核酸酶洗脱残余的核酸，清洗，冻干得到大鼠阴茎海绵体脱细胞支架，再消化，交联得到大鼠阴茎海绵体脱细胞水凝胶。本发明方法制备的大鼠阴茎海绵体脱细胞支架、水凝胶更好地保留了阴茎海绵体细胞原有的ECM结构、活性成分和一些非抗原成分如多糖、胶原蛋白、糖蛋白和纤维连接蛋白等，许多天然的细胞结合位点被保存在支架中，有助于再生过程中细胞的粘附、增殖和分化。