本发明属于临床医学领域，具体涉及一种膀胱癌多基因甲基化检测试剂盒。具体地，本发明提供了一种诊断膀胱癌的引物和探针的组合物，所述组合物中含有以下一组或多组：第一组：具有如SEQ ID NO.1所示序列的第一上游引物，具有SEQ ID NO.2所示序列的第一下游引物和具有SEQ ID NO.3所示序列的第一探针、第二组：具有如SEQ ID NO.4所示序列的第二上游引物，具有SEQ ID NO.5所示序列的第二下游引物和具有SEQ ID NO.6所示序列的第二探针、第三组：具有如SEQ ID NO.7所示序列的第三上游引物，具有SEQ ID NO.8所示序列的第三下游引物和具有SEQ ID NO.9所示序列的第三探针。