本发明公开了一种不饱和透明质酸钠二糖的制备方法及其应用，属于寡聚透明质酸钠制备技术领域，所述制备方法包括：酶解，分离，干燥；本发明在不饱和透明质酸钠二糖的制备中无有机溶剂使用，无环境污染，仅采用一步透明质酸酶酶解，且酶解后只需要一步有机膜超滤工艺，工艺简单，无需再次脱盐浓缩、过滤除菌及使用活性炭吸附，滤液直接干燥；且产率高，成本低，适合于大规模工业化生产；制备得到的不饱和透明质酸钠二糖的纯度高，杂质少，无细胞毒性，在体外紧致、抗皱、修复等方面表现出良好的功效，能够应用于化妆品、食品、保健品、医药、医疗器械领域。