本发明公开了一种具有抗肿瘤激活免疫应答的灰树花多糖及制备方法和应用。灰树花多糖GFI‑21α，分子量为1477431Da，单糖组成为葡萄糖，其主链的连接方式为→4)‑α‑D‑Glcp‑(1→的糖苷键，而支链为→3)‑α‑D‑Glcp‑(1→，通过→3,4)‑α‑D‑Glcp‑(1→的O‑3键连接到主链，其构型为α，为一种新的多糖物质，具有抑制肿瘤生长的功能和重新激活被癌细胞诱导抑制的机体免疫应答的功能，抑制乳腺癌细胞在小鼠体内生长达到极其显著，抑制率可以达到95.2±1.36％，并提升了肿瘤小鼠机体的免疫功能，可用于制备治疗肿瘤的药品、免疫调节药物及保健品。