本发明属于TaqMan实时荧光定量PCR技术领域，具体涉及一种茶烟中烟草材料TaqMan实时荧光定量PCR的引物和探针、检测方法及应用。所述引物包括上游引物Ntsp056‑F和下游引物Ntsp056‑R，所述上游引物Ntsp056‑F的序列如SEQ ID NO:1所示，所述下游引物Ntsp056‑R的序列如SEQ ID NO:2所示；所述探针为Ntsp056‑Probe，所述探针Ntsp056‑Probe的序列如SEQ ID NO:3所示。所述检测方法为采用2所述的引物和探针对茶烟中的烟草材料进行TaqMan实时荧光定量。本发明提供的引物和探针特异性强，可用于精准、稳定、快速鉴定茶烟中是否存在烟草材料，本发明提供的检测方法精准、稳定、便捷且高灵敏度，适于推广应用。