本发明公开了一种抗细粒棘球绦虫的EgMDH DNA疫苗及制备方法和应用，属于免疫学领域。所述DNA疫苗包括重组质粒PVAX1‑EgMDH和佐剂。所述DNA疫苗为所述重组质粒PVAX1‑EgMDH与所述佐剂按照质量体积比为1μg:(1‑3)μL混合而成。通过实验发现，该DNA疫苗能够促进动物机体产生体液和细胞免疫反应，且在免疫前期偏向Th1型细胞介导的细胞免疫反应，在攻虫后20d开始偏向Th2型细胞介导的体液免疫反应；可使包囊减少率达到80％，对脾脏具有一定的保护性效果。本发明公开的PVAX1‑EgMDH DNA疫苗具有成为棘球蚴病候选疫苗的潜力。