本发明提供了一种杂交瘤细胞及其分泌的抗猪瘟E2蛋白单克隆抗体和应用，涉及生物技术领域。本发明提供的杂交瘤细胞株1B6，能够分泌特异性识别猪瘟E2蛋白的单克隆抗体，分泌的单克隆抗体与猪瘟病毒粒子、重组构建表达E2蛋白具有良好的反应原性，可用于Western‑Blot、间接免疫荧光试验、胶体金检测、猪瘟E2蛋白抗原ELISA定量的检测，可用于鉴定猪瘟病毒和E2蛋白、测定猪瘟病毒含量、检测猪瘟抗原。该抗体能特异性识别多个猪瘟病毒株，应用范围广。克服了一般单克隆抗体识别抗原谱窄不足，有助于减少抗体购买量，大大降低试验检测成本。