本发明涉及一种基于银纳米团簇荧光响应体系的叶酸检测方法，属于生物标志物检测技术领域。本发明通过在缓冲液中混合叶酸结合蛋白、聚蔗糖400、硝酸银和柠檬酸钠，在叶酸结合蛋白中原位还原矿化纳米银，形成纳米银团簇，结合叶酸发生荧光增强。制备完成后加入抗氧化剂辅酶Q10，提高银纳米团簇荧光响应体系的贮存稳定性，使其在冷藏30天后仍能保持较好的检测活性。将本发明提供的银纳米团簇荧光响应体系与叶酸标准品溶液混合，检测荧光强度的变化制作标准曲线，将经过抗坏血酸处理的待测全血样本与叶酸荧光响应探针共同孵育，即可测得红细胞叶酸的含量，检测线性范围为0‑80ng/mL，检测限为2.5ng/mL，操作简单，特异性强，有良好的应用前景。