本发明公开一种氚代血根碱及其制备方法与应用。所述氚代血根碱是一种采用放射性同位素3H在N‑甲基上定位标记的盐酸血根碱，其具有高比活度、高稳定性。制备方法具体是以酰胺化合物为原料，在碱性及低温的条件下与氚标碘甲烷发生甲基化反应，得到化合物3；再利用DDQ氧化化合物3得到化合物4；之后在化合物4中加入四氢铝锂还原，然后再加入盐酸搅拌、过滤，即得所述氚代血根碱。本发明的制备方法简单、成本低且制得的氚代血根碱比活度高、放射性稳定、化学纯度和放化纯度高。本发明提供的氚代血根碱能作为放射性示踪剂用于研究血根碱在动物体内的吸收、分布、代谢及残留消除规律，评价血根碱相关药物的安全性。