本申请涉及一种从积雪草中提取羟基积雪草苷的方法，包括如下步骤：将积雪草全草干燥、粉碎，制备积雪草粉末；将积雪草粉末与体积百分比为30%~80%的乙醇水溶液混合，进行超声处理和加热处理，制备提取液；除去所述提取液中的乙醇，以石油醚进行萃取，制备萃取液；将所述萃取液上样至大孔树脂柱，先采用体积百分比小于或等于20%的乙醇水溶液冲洗，再采用体积百分比为30%~80%的乙醇水溶液洗脱，收集第一洗脱液；将所述洗脱液上样至高效液相色谱，根据色谱图收集含羟基积雪草苷的第二洗脱液；将所述第二洗脱液浓缩后，以甲醇进行结晶处理，制备所述羟基积雪草苷。该方法能够制备得到较高纯度的羟基积雪草苷，同时还具有较高的收率。