本发明涉及水质检测，微流控及分析化学领域，公开了一种检测水中氨氮浓度的冻干球组合物和应用。所述冻干球组合物包含冻干球A和冻干球B；所述冻干球A的制备方法包括以下步骤：(1)将赋形剂、水杨酸钠、酒石酸钠、亚硝基铁氰化钠、柠檬酸钠和水混合，得到混合液A；(2)将混合液A滴入液氮中固化形成小球A，将小球A冷冻干燥；所述冻干球B的制备方法包括以下步骤：S1：将赋形剂、氢氧化锂、二氯异氰脲酸钠、酒石酸钠和水混合，得到混合液B；S2：将混合液B滴入液氮中固化形成小球B，将小球B冷冻干燥。本发明将检测试剂制备成冻干试剂球后，能够有效提高试剂的溶解速度，缩短反应时间，提高检测的重复性和均一性。