本发明提供一种抗疲劳组合物、双层营养棒和制备工艺及其应用，所述抗疲劳组合物包括如下原料及其重量份：枸杞粉1‑1.5份，咖啡粉2份，黄精粉0.3‑1份，蛹虫草粉0.2‑1份，红糖2份，人参粉1‑3份，玉米低聚肽2份，牛蒡根提取物1‑2.5份；所述双层营养棒包括如下原料及其重量份：复合蛋白粉15‑25份，抗性糊精4.5‑6份，山药粉1‑3份，魔芋粉1‑2份，聚葡萄糖粉3‑5份，VC 0.1‑0.2份，山楂粉1‑3份，奇亚籽0.5‑1份，腰果碎6‑12份，杏仁碎5‑10份，巴旦木碎4‑8份，椰子油2.5‑4份，甘油1‑2份，复配抗氧化剂0.1‑0.3份，糖浆25‑40份，以及抗疲劳组合物5‑10份；所述抗疲劳组合物和所述双层营养棒具有抗疲劳的作用，可广泛应用在制备抗疲劳产品中。