本发明公开了一种定容方法、微流控定容模块、建库系统和建库方法，属于微流控技术领域。该定容方法应用于微流控定容模块，所述微流控定容模块包括第一定容腔、定容进料通道和排气通道，在所述定容进料通道和所述第一定容腔之间设置有进料阀门；在所述排气通道和所述第一定容腔之间设置有排气阀门。所述方法包括：S1、关闭所述排气阀门并开启所述进料阀门，以使进料通过所述定容进料通道进入所述第一定容腔；S2、关闭所述进料阀门后开启所述排气阀门，以使所述第一定容腔中气体由所述排气通道排出；S3、循环执行步骤S1和步骤S2设定次数，至所述进料充满所述第一定容腔。