本发明涉及具有SOD酶活性的铜单原子碳点纳米酶及制备方法和应用。该具有SOD酶活性的铜单原子碳点纳米酶，通过在氮掺杂碳量子点表面负载铜单原子获得，所述铜单原子以Cu2+的形式分散在氮掺杂碳量子点表面。本发明中氮掺杂碳量子点表面存在多种不对称C和N位点，而N的存在有利于促进Cu2+分散，减少Cu2+团聚，通过N与Cu2+配位，实现稳定的Cu2+的原子级分散，确保了本发明的具有SOD酶活性的铜单原子碳点纳米酶的高活性、稳定性和金属经济性。