本实用新型公开一种一次性封闭式核酸检测装置，包括切割腔室、测试腔室、盖子，测试腔室左侧顶面低于右侧顶面，切割腔室安装在测试腔室左侧顶面上，测试腔室左侧顶面为安装平台，安装平台设有缓冲液安装槽、反应管安装槽，缓冲液安装槽底端连通测试腔室，缓冲液安装槽顶端连通切割腔室，反应管安装槽底端连通测试腔室，反应管安装槽顶端连通切割腔室，测试腔室内设置有试纸组件，切割腔室顶面为开口结构，切割腔室顶面设有第一密封，第一密封为铝箔或塑料膜，盖子适配切割腔室顶面，盖子底面设有穿刺针、刀片，穿刺针对应缓冲液安装槽，刀片对应反应管安装槽。本实用新型可以减少核算交叉污染，便于携带，适用于多种检测配置。