本发明揭示出由氮杂内酯类异构物平衡混合物、水和一或多种酸构成的抗生素组合物以及制备此等组合物的方法。经由添加一或多种水混溶性共溶剂可以有利地稳定该抗生素组合物。在一较佳聚体实例中，该一或多种共溶剂为丙二醇。 Antibiotic compositions comprising an equilibrium mixture of azalide isomers, water, and one or more acids, and methods for preparing such compositions, are disclosed. The antibiotic compositions can be advantageously stabilized by adding one or more water-miscible co-solvents. In a preferred embodiment, the one or more co-solvents is propylene glycol. 【创作特点】 发明概要 在第一具体实例中，本发明系有关一种组合物，其包括：(a)通式Ⅰ化合物和通式Ⅱ化合物 二者的比例为约90%±4%到10%±4%;(b)水，和(c)一或多种酸，其总浓度在每毫升组合物中含有0.2毫莫耳到约1.0毫莫耳。 本发明系有关获得一种组合物的方法，该组合物包括：(a)通式Ⅰ化合物和通式Ⅱ化合物，二者的比例为约90%±4%到10%±4%;(b)水，和(c)一或多种酸，其总浓度为在每毫升组合物中含有0.2毫莫耳到约1.0毫莫耳，该方法包括下述步骤：将以下混合物加热到约50到90℃，该混合物包括(a)通式Ⅰ化合物，(b)水，和(c)一或多种酸，其总量为在每毫升该混合物中有0.2毫莫耳到约1.0毫莫耳。在一较佳具体实例中，该混合物的pH值为约5.0到约8.0，且更佳者为约5.0到约6.0。 本发明系有关治疗哺乳动物细菌或原生动物感染之方法，包括向需要这种治疗的哺乳动物施以治疗有效剂量的组合物，该组合物包括：(a)通式Ⅰ化合物和通式Ⅱ化合物，二者的比例为约90%±4%到约10%±4%;(b)水，和(c)一或多种酸，其在每毫升该混合物中的含量为0.2毫莫耳到约1.0毫莫耳。在较佳具体实例中，该混合物的pH值为约5.0到约8.0，且更佳者为约5.0到约6.0。在另一较佳具体实例中，该细菌或原生动物感染系由下列组合中选出者：牛呼吸疾病、猪呼吸疾病、肺炎、球虫病、弓形体病和传染性眼炎。 本发明系有关一种组合物，包括：(a)一种混合物，包含：(i)通式Ⅰ化合物和通式Ⅱ化合物，二者的比例为约90%±4%到约10%±4%;(Ⅱ)水和(Ⅲ)一或多种酸，其在每毫升该混合物中的含量为0.2毫莫耳到约1.0毫莫耳；及(b)一或多种水混溶性共溶剂，其在每毫升组合物中的总量为约250毫克到750毫克。 本发明系有关一种获得以下组合物的方法，其包括：(a)一种混合物，包含：(i)通式Ⅰ化合物和通式Ⅱ化合物，二者的比例为约90%±4%到约10%±4%;(Ⅱ)水和(Ⅲ)一或多种酸，其在每毫升该混合物中的含量为0.2毫莫耳到约1.0毫莫耳；及(b)一或多种水混溶性共溶剂，其在每毫升组合物中的总量为约250毫克到750毫克，该方法包含下述步骤：于混合物中添加一或多种水混溶性共溶剂，其在每毫升组合物中的总量为约250毫克到750毫克。 本发明也有关获得以下组合物的方法，其包括：(a)第一种混合物，包含：(i)通式Ⅰ化合物和通式Ⅱ化合物，二者的比例为约90%±4%到约10%±4%;(Ⅱ)水和(Ⅲ)一或多种酸，其在每毫升该混合物中的含量为0.2毫莫耳到约1.0毫莫耳；和(b)一或多种水混溶性共溶剂，其在每毫升组合物中的总量为约250毫克到750毫克该方法包括下述步骤：将由通式Ⅰ化合物、水和一或多种酸(在每毫升该混合物中的含量为0.2毫莫耳到约1.0毫莫耳)组成的混合物加热到50到90℃，其中在加热前或加热过程中或加热后，加入一或多种水混溶性共溶剂，其在每毫升组合物中的总量为约250毫克到750毫克。 本发明系有关一种保持通式Ⅰ或通式Ⅱ化合物结构完整性的方法，其包括下述步骤：将一或多种水混溶性共溶剂添加到以下混合物中，其包括：(a)通式Ⅰ化合物和通式Ⅱ化合物；(b)水和(c)一或多种酸，在每毫升该混合物中的总含量为约0.2毫莫耳到约1.0毫莫耳，其中水混溶性共溶剂的添加量为在每毫升组合物中约250毫克到750毫克。 本发明系有关治疗哺乳动物的细菌或原生动物感染之方法，包括向需要这种治疗的哺乳动物施以治疗有效剂量的组合物，包括：(a)(i)通式Ⅰ化合物和通式Ⅱ化合物，二者的比例为约90%±4%到约10%±4%;(Ⅱ)水；和(Ⅲ)一或多种酸，在每毫升该混合物中的含量为0.2毫莫耳到约1.0毫莫耳；和(b)一或多种水混溶性共溶剂，其在每毫升组合物中的总量为约250毫克到750毫克。 本发明一具体实例中，一或多种酸是由以下各酸组成之群中选出：乙酸、苯磺酸、柠檬酸、氢溴酸、盐酸、D-和L-乳酸、甲烷磺酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、D-和L-酒石酸、对-甲苯磺酸、己二酸、天冬胺酸、樟脑磺酸、1,2-乙烷二磺酸、月桂基硫酸、葡萄庚酸、葡萄糖酸、3-羟基-2-萘甲酸、1-羟基-2-萘甲酸、2-羟基乙烷磺酸、苹果酸、黏液酸、硝酸、萘磺酸、棕榈酸、D-葡萄糖二酸、硬脂酸、马来酸、丙二酸、延胡索酸、苯甲酸、胆酸、乙烷磺酸、葡萄糖醛酸、榖胺酸、马尿酸、乳糖酸、离胺酸、扁桃酸、1,5-萘二磺酸(napadisylic acid)、烟碱酸、多聚半乳糖醛酸、水杨酸、磺基水杨酸、色胺酸和彼等的混合物。 在一较佳具体实例中，该一或多种酸是柠檬酸。在另一较佳实施例中，该一或多种酸是柠檬酸和盐酸。在一更佳具体实例中，柠檬酸在每毫升组合物中的含量为约0.02毫莫耳到约0.3毫莫耳且盐酸的含量为足以使组合物pH值达到约5到6。 在本发明组合物一具体实例中，该一或多种水混溶性共溶剂系由下列组成之群中选出：乙醇、异丙醇、二乙二醇一甲基醚、二乙二醇丁基醚、二乙二醇一乙基醚、二乙二醇二丁基醚、聚乙二醇-300、聚乙二醇-400、丙二醇、甘胺酸、2-吡咯烷酮、N-甲基-2-吡咯烷酮、甘油甲缩醛、二甲亚砜、癸二酸二丁基酯、聚山梨醇酯80和彼等的混合物。 在其一具体实例中，该一或多种水混溶性共溶剂是丙二醇。在一较佳具体实例中，该聚乙二醇的含量为每毫升组合物中为约450到约550毫克。 本发明组合物一具体实例中，该组合物更包括一或多种抗氧化剂，其在每毫升组合物中的含量为约0.01毫克到约10毫克。在较佳具体实例中，该一或多种抗氧化剂是由下列组成之群中选出：亚硫酸氢钠、亚硫酸纳、偏亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、甲醛次硫酸钠、L-抗坏血酸、异抗坏血酸、乙酰基半胱胺酸、半胱胺酸、单硫代甘油、氢硫基乙酸、硫代乳酸、硫脲、二硫苏糖醇、二硫赤藓糖醇、谷胱甘肽、抗坏血酰基棕榈酸酯、丁基羟基苯甲醚、丁基羟基甲苯、去甲二氢愈创木酸、没食子酸丙酯、α-生育酚和彼等的混合物。在一更佳具体实例中，该一或多种抗氧化剂是单硫代甘油。在一特佳具体实例中，在每亳升组合物中，单硫代甘油的含量为约4毫克到约6毫克。 本发明组合物的一具体实例中，第一种混合物(化合物Ⅰ和化合物Ⅱ)的浓度为约50毫克/毫升到约200毫克/毫升。在一更佳实例中，第一种混合物在组合物中的浓度为约90毫克/毫升到约110毫克/毫升。 本发明组合物的一特佳具体实例中，柠檬酸在每毫升组合物中的含量为约0.02毫莫耳到约0.3毫莫耳且盐酸的含量为足以使组合物的pH值达到约5到约6；其中丙二醇在每毫升组合物中的含量为约450到约550毫克，且其中单硫代甘油的含量为4毫克/毫升到约6毫克/毫升。 本发明更有关一种下列通式化合物或其医药可接受的盐；其中R 1 为OH或且其中R 2 为H或CH3。 经由参照详细说明和阐述性实施例可以更全面地理解本发明，其中该等实施例系打算用来示范说明本发明的非限制性具体实例。 发明之详细说明 本发明系有关医药组合物，其包含异构物Ⅰ和异构物Ⅱ(合称为“氮杂丙酯类异构物”)，二者的比率为约90%±4%到约10%±4%。异构物Ⅰ的化学名称为(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-13-((2,6-二去氧-3-C-甲基-3-O-甲基-4-C-((丙基胺基-甲基)-α-L-蚍喃己核糖基)氧基-2乙基-3,4,10-三羟基-3,5,8,10,12,14-六甲基-11-((3,4,6-三去氧-3-(二甲胺基)-β-D-蚍喃己木糖基)氧基-1-氧杂-6-氮杂环十五烷-15-酮。异构物Ⅱ的化学名称是(3R,6R,8R,9R,10S,11S,12R)-11-((2,6-二去氧-3-C-甲基-3-O-甲基-4-C-((丙基胺基)甲基-α-L-蚍喃己核糖基)氧基-2-((1R,2R)-1,2-二羟基-1-甲基丁基)-8-羟基-3,6,8,10,12-五甲基-9-((3,4,6-三去氧-3-(二甲胺基)-β-D-蚍喃己木糖基)氧基)-1-氧杂-4-氮杂环十三烷-13-酮。异构物Ⅰ可经由异构物Ⅱ的转内酯化反应获得。同样地，对异构物Ⅰ的转内酯化反应也可以获得异构物Ⅱ。获得异构物Ⅰ的方法在国际公报WO 98/56802中有记载，其附于此作为参考。获得异构物Ⅱ的方法在以下实施例1中说明。氮杂内酯类异构物是活性抗生素剂。于不受任何理论的约束之下，本发明部分是基于申请人惊奇地发现由保持90%%±4%到约10%±4%的比率的异构物Ⅰ和异构物Ⅱ构成的组合物可以经由在此说明的方法很容易地获得，不论氮杂内酯类异构物开始的比率如何。虽然不是绝对肯定，但是申请人相信异构物Ⅰ和异构物Ⅱ保持约90%%±4%到约10%±4%的比率形成氮杂内酯类异构物平衡混合物。相应地，本文中所用的“异构物的平衡混合物”指的是异构物Ⅰ和异构物Ⅱ保持约90%%±4%到约10%±4%的比率。由平衡混合物构成的异构物的抗生素组合物能够一致地生产并提供测试或消费者使用的一种标准。因此，由异构物的平衡混合物构成的组合物具有极高的价值。 本发明更有关一种获得由异构物的平衡混合物构成的组合物的方法。在一具体实例中，异构物的平衡混合物是从实质纯的异构物Ⅰ的溶液中获得。如本文中所用者“实质纯”，除非特别指出，指的是具有97%的纯度。在另一具体实例中，异构物平衡混合物是从异构物Ⅰ和异构物Ⅱ的混合液中获得。一般而言，异构物的平衡混合物是经由在一或多种酸的存在中，加热异构物Ⅰ，较佳者实质纯异构物Ⅰ，或异构物Ⅰ和异构物Ⅱ的混合物之水溶液而产生。在较佳具体实例中，系在pH值为5.0到约8.0，较佳者约6.0到约8.0下，将异构物Ⅰ和一或多种酸的水溶液加热到约50℃到90℃，较佳者约60到80℃，约0.5到约24小时，较加者加热1到10小时。最佳者系在有一或多种酸的存在中，于pH值为约6.5到约7.5之下，将异构物Ⅰ和异构物Ⅱ的溶液加热到65到75℃之间的温度，约1到约8小时。异构物Ⅰ的浓度或平衡的异构物Ⅰ和异构物Ⅱ的混合溶液的浓度可以从约50毫克/毫升到约500毫克/毫升。更佳的是约100毫克/毫升到约300毫克/毫升，且最佳的是约225毫克/毫升到约275毫克/毫升。 可以获得异构物的平衡混合物的适当酸包括，但是不局限于：乙酸、苯磺酸、柠檬酸、氢溴酸、盐酸、乳酸、甲烷磺酸、磷酸、琥珀酸、硫酸酒石酸、P-甲苯磺酸、己二酸、天冬胺酸、樟脑磺酸、1,2-乙烷二磺酸、月桂基硫酸葡萄庚酸葡萄糖酸、3-羟基-2-萘甲酸、1-羟基-2-萘甲酸、2-羟基乙烷磺酸、苹果酸、黏液酸硝酸、萘磺酸、棕榈酸、D-葡萄糖二酸硬脂酸、马来酸、丙二酸、延胡索酸、苯甲酸、胆酸、乙烷磺酸、葡萄糖醛酸、榖胺酸、马尿酸、乳糖酸、离胺酸、扁桃酸、napadisylic acid烟碱酸、多聚半乳糖醛酸、水杨酸、磺基水杨酸、色胺酸和彼等的混合物。较佳者该一或多种酸为柠檬酸和盐酸。使用柠檬酸时，其浓度为每毫升溶液中约0.02到约0.3毫莫耳。在一具体实例中，使用酸的浓度为每毫升溶液约0.2到约1.0毫莫耳。于不受任何理论的限制下，申请人相信，于异构物Ⅰ的溶液中加入一种酸获得的盐具有缓冲作用，这是因为氮杂内酯类异构物作为碱之故。那些熟谙此艺者知道要获得合意的pH值，使用的酸不同，其使用的数量也不同，且，要保持pH值处于合意范围中时，可能要在酸与异构物Ⅰ，或与异构物Ⅰ和异构物Ⅱ的混合物，之溶液中再添加酸或碱。合适的碱包括，但不局限于：碱金属氢氧化物、碱金属碳酸盐、碱金属碳酸氢盐、碱土金属氢氧化物和碱土金属碳酸盐。氢氧化钠和氢氧化钾为较佳者。上述酸和碱在使用时多采用其水溶液。 由异构物的平衡混合物构成的组合物(“平衡组合物”)可以治疗哺乳动物的细菌或原生动物感染。平衡组合物同样也可以作为形成经稳定化、平衡组合物的中间体。 本发明更有关经稳定化平衡组合物以及使之稳定化的方法，其包括经由一或多种水混溶性有机溶剂(共溶剂)来稀释平衡组合物。共溶剂不会明显改变平衡组合物中异构物Ⅰ和异构物Ⅱ的比率，且实际上能保持彼等的结构完整性。在此所用的“保持异构物Ⅰ和异构物Ⅱ的结构完整性”包括但不局限于，延迟彼等变成，如：去红梅糖(去红梅糖)氮杂内酯类的水解速率，以及延迟其副产物的产生速度，如：下述甲醛和乙醛的插入产物。于不受任何理论的限制之下，申请人相信经由共溶剂稀释可提高氮杂内酯类异构物的稳定性。此外，由于有共溶剂，注射经稳定化平衡组合物的疼痛要比注射没有经过稳定化处理的平衡组合物的疼痛来得轻。能用来稳定化平衡组合物的共溶剂包括但不局限于，醇类例如乙醇和异丙醇；二醇醚类例如二乙二醇一甲基醚、二乙二醇丁基醚，二乙二醇一乙基醚和二乙二醇二丁基醚；聚乙二醇例如聚乙二醇-300和聚乙二醇-400；二醇类例如丙二醇("PG")和甘油；吡咯烷酮类例如2-吡咯烷酮和N-甲基2-吡咯烷酮；甘油甲缩醛；二甲亚砜；癸二酸二丁基酯；聚氧化乙烯山梨醇酯例如聚山梨醇酯80；和彼等的混合物。用来将注射液中的平衡组合物予以稳定化所用的较佳共溶剂包括但不局限于：聚乙二醇，如：聚乙二醇-300和聚乙二醇-400；二醇类如丙二醇和甘油；吡咯烷酮如：2-吡咯烷酮和N-甲基-2-吡咯烷酮；甘油甲缩醛；二甲亚砜；聚氧化乙烯山梨醇酯例如聚山梨醇酯80；和彼等的混合物，更佳者为，甘油甲缩醛，N-甲基-2-吡咯烷酮和丙二醇，且最佳者为丙二醇。在一具体实例中，用来使医药组合物稳定化的共溶剂浓度为约每毫升250到约750毫克。在一较佳具体实例中，共溶剂的用量为每毫升医药组合物中约400到600毫克。在一最佳具体实例中，共溶剂的用量为每毫升医药组合物中约450到约550毫克。 在一具体实例中，在平衡之前，将一或多种共溶剂添加到异构物Ⅰ或异构物Ⅰ和异构物Ⅱ的混合物中。在这种情况下，系在pH值为5.0到约8.0，较佳者约6.0到约8.0下，将所得混合物加热到约50℃到90℃，较佳者约60到80℃，约0.5到约24小时，较加者加热1到10小时。在一较佳具体实例中，氮杂内酯类异构物的平衡处理系在没有共溶剂之下进行，共溶剂系在平衡组合物的温度降低到室温后才加入。 在加入共溶剂后，所得溶液的pH值可再调节以进一步提高组合物的稳定性。调节pH值的方法系熟谙此艺者所知者，例如经由添加一量的上述酸或碱，如：以10% (w/w)储液之形式，且使用如pH计来测定所得溶液的pH值。在一具体实例中，如果需要，所得溶液的pH值可调整到约4.5到约7.5，较佳者约5.0到约6.0，最佳者约5.2到约5.6。 本发明更有关医药组合物，其包括异构物平衡混合物、水、一或多种酸以及一或多种水混溶性共溶剂。在该医药组合物中，氮杂内酯类异构物的含量为每毫升医药组合物中为约50毫克到约200毫克氮杂内酯类异构物。较佳者，该医药组合物包括每毫升该医药组合物约75到约150毫克，更佳者约90到约110毫克氮杂内酯类异构物。 该医药组合物还可含有一或多种抗氧化剂。抗氧化剂推迟或阻止了医药组合物的氧化分解。合适的抗氧化剂包括但不局限于：硫酸氢钠、亚硫酸纳、偏亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、甲醛次硫酸钠、L-抗坏血酸、异抗坏血酸、乙酰基半胱胺酸、半胱胺酸、单硫代甘油("MTG")、氢硫基乙酸、硫代乳酸、硫脲、二硫苏糖醇、二硫赤藓糖醇、谷胱甘肽、抗坏血酰基棕榈酸酯、丁基羟基苯甲醚、丁基羟基甲苯、去甲二氢愈创木酸、没食子酸丙酯、α-生育酚和彼等的混合物。熟谙此艺者知道，抗氧化剂不同，其使用的数量也各异。在一较佳具体实例中，使用抗氧化剂时，其数量为每毫升医药组合物中含0.01毫克到约10毫克。在一更佳具体实例中，运用的抗氧化剂为单硫代甘油，其在每毫升医药组合物中含约1毫克到8毫克。在一最佳具体实例中，使用的抗氧化剂为单硫代甘油，其在每毫升医药组合物中约占4毫克到约6毫克。 医药组合物中可视需要含有一或多种防腐剂。防腐剂的作用是延缓或阻止微生物的繁殖，特别是当医药组合物暴露在空气中时。有效的防腐剂具有以下特点：能有效抑制大范围的微生物；在医药组合物的寿命期内，具有物理的、化学的和微生物学上的稳定性；无毒的；可充分溶解的；与组合物的其他成份兼容的；并且在味道和气味上是能被接受的。合适的防腐剂包括但不局限于：氯苄烷胺、氯化苄乙氧胺、苯甲酸、苯甲醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、苯甲酸钠、酚和彼等的混合物。在一较佳具体实例中，一或多种防腐剂是从以下各物组成之群中选出：苯甲醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯丙酸丙酯、对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯丙酸丙酯的组合物、和酚。当使用防腐剂时，其在每毫升医药组合物中含约0.01到约10毫克。更佳者，该一或多种防腐剂是酚，且其含量为每毫升医药组合物含2.0到5.0毫克，更佳者约2.0到约3.0毫克。熟谙此艺者都知道，在医组合物中防腐剂的使用量是由选用的防腐剂所决定的，某些防腐剂可用较低浓度使用，甚至低于每毫升医药组合物约0.01毫克。 在一较佳具体实例中，本发明医药组合物具有的pH值从约5.0到7.0，包括：(1)异构物的平衡混合物，其在每毫升医药组合物中含约50到200毫克；(2)柠檬酸，其浓度为每毫升医药组合物中含约0.02到约0.3毫莫耳，及视情况的一量之盐酸，其含量能有效地达到pH值范围；(3)丙二醇，每毫升医药组合物中含约250到约750毫克；(4)单硫代甘油，每毫升医药组合物中含约1到约15毫克；(5)水，每毫升医药组合物中含约100到约750毫克。 在一更佳具体实例中，本发明医药组合物的pH值为约5.0到约6.0，且包括：(1)异构物的平衡混合物，其在每毫升医药组合物中含约75到约150毫克；(2)柠檬酸，其浓度为每毫升医药组合物中含约0.05到约0.15毫莫耳，及视情况的一量之盐酸，其含量能有效地达到pH值范围；(3)丙二醇，每毫升医药组合物中含约400到约600毫克；(4)单硫代甘油，每毫升医药组合物中含约1到约8毫克；(5)水，每毫升医药组合物中含约250到约550毫克。 在一最佳具体实例中，本发明医药组合物的pH值为约5.2到约5.6，且包括：(1)异构物的平衡混合物，其在每毫升医药组合物中含约90到110毫克；(2)柠檬酸，其浓度为每毫升医药组合物中含约0.075到约0.125毫莫耳和一量的盐酸，其含量能有效地达到pH值范围；(3)丙二醇，每毫升医药组合物中含约450到约550毫克；(4)单硫代甘油，每毫升医药组合物中含约4到约6毫克；(5)水，每毫升医药组合物中含约300到500毫克。 医药组合物可以经由如下的方法制得。将试剂放入装有氮覆盖的不锈钢或玻璃衬里的容器中。于反应容器中添加用于注射用水，并开始搅拌。加入所有附加成份，并不断搅拌混合物。将每毫升水约0.02到约0.5毫莫耳的酸加入，并使之溶解。视需要加入一种酸的水溶液，譬如：10%(w/w)盐酸水溶液，来调整pH值，使之达到合意范围，并混合溶液。此刻，于水和酸的混合液中缓慢加入少量异构物Ⅰ和异构物Ⅱ的混合物以避免结块。使异构物Ⅰ或异构物Ⅰ和异构物Ⅱ的混合物溶解，并测量所得溶液的pH值。在一具体实例中，异构物Ⅰ或异构物Ⅰ和异构物Ⅱ的混合物在每毫升所得溶液中占约50毫克到约500毫克，较佳者约100到约300毫克，且最佳者约225到约275毫克。将溶液加热到约70±10℃，并保持这个温度，直到获得异构物的平衡混合物。确定已获得异构物的方法包括：凝胶层析术，薄层层析术以及高效液相层析术。一般而言，使用在此说明的条件，在约1到8小时就可以获得异构物的平衡混合物。一旦获得异构物的平衡混合物，将所得溶液冷却到约25±10℃。该溶液可作为医药组合物。更佳的是，于每毫升该医药组合物中加入约250到约750毫克共溶剂。视情况加入的抗氧化剂之添加量为约每毫升医药组合物中约0.01到约10毫克。如果有添加防腐剂时，则其添加量为每毫升医药组合物中约0.01到约10毫克，且添加酸或碱，例如：10%的(w/w)水溶液或固态形式者，将pH值调整到约5.0到约8.0，较佳者约5.0到约6.0。将所得溶液稀释到合意体积。在一具体实例中，异构物的平衡混合物在每毫升所得医药组合物中的含量为约50毫克到200毫克，较佳者约75毫克到约150毫克，且最佳者为约90到约110毫克。 最好将所得组合物进行消毒，例如，将组合物通过一预滤器，如：5-10微米的滤器且接着，通过一个0.2微米已事先消毒过的最终灭菌滤器。在滤器消毒之前以及产物过滤之后，将该灭菌滤器在121℃下，经湿热高压消毒60分钟，并经由压力-保持法测试其完整性。将无菌溶液加到合适的容器中，如：玻璃瓶，该玻璃瓶已在干熱的管道中在250℃的温度下去热原240分钟。将容器顶部空间充满惰性气体，如：氩气，或较佳者氮气。将容器用塞子盖住，彼等已在121℃的温度下经湿热高压消毒60分钟。接着将容器密封。熟谙此艺者知道，可对以上说明作微小变更以制得无菌组合物。 本发明更有关治疗哺乳动物的方法，包括给需要此治疗的哺乳动物服用有效剂量的本发明医药组合物。本发明医药组合物可以用来治疗革兰氏阳性细菌、革兰氏阴性细菌、原生动物、和支原体等感染，包括但不局限于：胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumonia)、多杀巴斯德氏菌(Pasteurella multocida)、溶血巴斯德氏菌(Pasteurella haemolytica)、H. parasuis、B. bronchiseptica、猪霍乱沙门式菌(S. choleraesuis)、S. pilo、牛莫拉氏菌(Moraxella bovis)、睡眠噬血菌(H. somnus)、M. bovis、Eimeria zuemⅡ、Eimeria bovis、A. maarginale、M. hyopneumoniae、Lawsonia intracellularis、和葡萄球菌、沙门氏菌属、衣原体属、球菌、隐孢虫属、大肠杆菌、噬血菌、neospora和链球菌种。 本文中所用的术语“治疗”，除非另外指明，否则包括本发明方法所提供的对细菌或原生动物感染的治疗或预防。 除非另外指明，否则本文中所用的“细菌感染”和“原生动物感染”包括在哺乳动物、鱼类以及鸟类身上发生的细菌感染和原生动物感染以及与细菌和原生动物感染有关的失调症，可以经由施以抗生素，如本发明的化合物，得到解决或预防者。这些细菌或原生动物感染以及失调症包括以下：与肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)、流感噬血菌(Haemopillus influenzae)、黏膜炎拉氏菌(Moraxella catarrhalis)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、或消化链球菌属(Peptostreptococcus spp.)感染有关的肺炎、中耳炎、窦炎、支气管炎、扁桃体炎和乳窦炎；和酿肿链球菌( Streptococcus pyogenes)、C和G组链球菌、白喉梭菌(Clostriduim diptheriae)或溶血放线杆菌(Actinobacillus haemolyticum)感染有关的咽喉炎，风湿热和肾小球性肾炎；与肺炎支原体、Legionella pneumophila、肺炎链球菌，流感噬血菌和肺炎衣原体感染引起的呼吸道感染；由金黄色葡萄球菌、凝固酶阳性葡萄球菌(如表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)、溶血葡萄球菌)、酿肿链球菌、无乳链球菌(Staphylococcus agalactiae)、链球菌C-F组(小菌落的链球菌)、绿色链球菌(Staphylococcus viridans)、最细棒杆菌(Corynebacterium minutissimum)、梭菌属、或Bartonella henselae等引起的未并发性皮肤和软组织感染、脓疮和骨髓炎，及产褥热；由腐生葡萄球菌(Staphyloccus saprophyticus)或肠球菌属引起的非并发性急性尿道感染；与砂眼衣原体(Chlamydia trachomatis)、杜氏噬血菌(Haemopillus ducreyi)、梅素密螺旋体(Treponema pallidum)、Ureaplasma urealyticum、或淋病奈瑟氏球菌(Neiserria gonorrheae)有关的尿道炎、子宫颈炎；和性传播疾病；与金黄色葡萄球菌(S. aureus)(食物中毒和中毒性休克征候群)或A、B和C组链球菌感染有关的毒素疾病；与幽门螺旋菌(Heliobacter pylori)感染有关的溃疡；与回归热包柔氏螺旋体(Borrlia recuuentis)感染有关的系统性发热征候群；与Borrlia burgdorferi感染有关的Lyme病；与沙眼衣原体、淋病奈瑟氏球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎葡萄球菌、酿脓葡萄球菌、流感噬血菌或利斯特氏小菌(Listeria spp.)感染有关的结膜炎、角膜炎和泪腺炎；与鸟分支杆菌(Mycobacterium avium)或胞内分支杆菌(Mycobacterium intracellulare)感染有关的传染性鸟分支杆菌综合症(MAC)；与空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni)感染有关的胃肠炎；与隐孢虫种感染有关的肠原生动物；与绿色链球菌感染有关的牙发生性感染；与白日咳博德特式菌(Bordetella pertussis)感染有关的持续性咳嗽；与产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)或拟杆菌(Bacteroides spp.)感染有关的气性坏疽；及与幽门螺旋菌或肺炎衣原体或博德特氏菌感染有关的动脉粥样硬化。在动物身上能够治疗或预防的与这些感染有关的细菌感染、原生动物感染和失调症包括：与溶血巴斯德氏菌、多杀巴斯德氏菌、牛枝原体或博德特氏菌感染有关的牛呼吸系统疾病、与大肠杆菌或原生动物(如：球虫、隐孢虫等)感染有关的牛肠的疾病；与金黄色葡萄球菌、乳房链球菌(Strep. uberis)、无乳链球菌、停乳链球菌(Strep. dysgalactiae)、克雷伯氏菌属(Klebsiella spp.)、棒杆菌属、或肠球菌属等的感染有关的奶牛乳腺炎；与胸膜肺炎放线杆菌、多杀巴斯德氏菌、或支原体属等的感染有关的猪呼吸系统疾病；与大肠杆菌、Lawsonia intracellularis、沙门氏菌属或Serpulina hyodyisinteriae感染有关的猪肠病；与梭杆菌(Fusobacterium spp.)感染有关的牛腐蹄病；与大肠杆菌感染有关的乳腺炎；与坏死梭杆菌(Fusobacterium necrophorum)或节瘤拟杆菌(Bacteroides nodosus)感染有关的牛茸毛疣；与牛莫拉氏菌属感染有关的牛红眼病；与原生动物(例如：新孢子虫(neosporium))感染有关的牛早产；与大肠杆菌感染有关的狗和猫的尿道感染；与表皮葡萄球菌、中叶葡萄球菌(Staph. Intermedius)、凝固酶阴性葡萄球菌或多杀巴斯德氏菌等感染有关的狗和猫的皮肤和软组织感染；与产碱菌属(Alcaligenes spp.)、拟杆菌属、梭菌属、肠杆菌属、真杆菌属、消化链球菌属、Porphyromonas、或Prevotella等感染有关的狗和猫的牙齿和口腔感染。可以根据本发明的方法进行治疗或预防之其他细菌感染、原生动物感染及与这些细菌感染有关的失调症，可参照J.P. Sanford et al. "The Sanford Guide to Antimicrobial Therapy"，第26版(Antimicrobial Therapy, Inc., 1996)。 本发明化合物的抗细菌和抗原生动物病原体的抗菌活性和抗原生动物活性是经由该化合物抑制特定的人类或动物病原体株系的性能来展现的。 检定Ⅰ 以下所说明的检定Ⅰ系运用传统的方法和解释标准，且经设计以提供化学改质以导致可能避免已界定的大环内酯抗性机制之化合物。在检定Ⅰ中，组合出一组细菌菌株，包括多种目标病原体种，包括已被称为大环内酯抗性机制的代表。使用此组可以决定化学结构/性能关系，包括效力、性能范围和结构要素，或必须避免抗药性机制的改质。由筛选组构成的细菌病原体显示在下表中。在许多情况下，从细菌病原体中衍生出的大环内酯敏感性母株和大环内酯抗性品系能对化合物克服抗病性机制的能力提供一个更为准确的评定。含有名称为ermA/ermB/ermC基因的菌株对大环内酯、lincosamides和链阳性菌素B抗生素具有抗性，这是由于Erm甲基化酶对23S rRNA分子的改质(甲基化)作用，藉而通常防止所有三种结构类的结合之故。说明了两种类型的大环内酯溢出物：msrA编码葡萄球菌中溢出物系统的成份，其可抑制大环内酯和链阳性菌素的进入；而mefA/E编码仅溢出大环内酯的透膜蛋白质。大环内酯抗生素的钝化作用可以发生，并且可以经由2N-羟基(mph)的磷酸化作用或大环内酯(酯酶)的裂解作用予以促成。运用传统的聚合酶链型反应(PCR)技术及/或对抗病性决定基因定序可决定菌株的特点。用于本申请案中的PCR技术载于J. Sutcliffe et al., "Detection of Erythromycin-resistant Determinants By PCR", Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 40(11), 2562-2566 (1996)之中。检定是在微滴定盘中进行，并且根据Performance Standars for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests-Sixth Edition; Approved Standard, The National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS)指引进行解释。使用最小抑制浓度( MIC)来比较菌株。氮杂内酯类异构物平衡混合物起初是溶解在二甲亚砜(DMSO)中作为浓度为40毫克/毫升的储液。 运用检定Ⅱ来测试抗多杀巴斯德氏菌的活性并用检定Ⅲ来测试抗溶血巴斯德菌的活性。 检定Ⅱ 此检定是基于在微升格式的液体稀释方法。将单一的多杀巴斯德氏菌(菌株59A067)菌落接种到5毫升的脑心注输(BHI)肉汤中。可以经由将1毫克的混合物溶解到125微升的二甲亚砜(DMSO)中获得氮杂内酯类异构物平衡混合物。运用没接种的BHI肉汤来配置氮杂内酯类异构物平衡混合物的稀释液。使用的氮杂内酯类异构物平衡混合物经两倍连续稀释后浓度从200微克/毫升到0.098微克/毫升不等。多杀巴斯德氏菌接种BHI溶液用未接种的BHI肉汤稀释制得每200微升含10 4 细胞的悬浮液。将BHI细胞悬浮液分别与氮杂内酯类异构物平衡混合物的连续稀释液混合，并且在37℃下温浸18小时。最小抑制浓度(MIC)为与未接种对照相比，等于能100%抑制多杀巴斯德氏菌的生长之混合物浓度。 检定Ⅲ 此检定系以使用Steers Replicator的琼脂稀释方法。将从琼脂盘中分离的二到五种菌落接种到BHI肉汤中并在37℃的条件下与前一天晚上进行，接种时，以每分钟200转的速度摇动。次日早晨，将300微升充分生长的溶血巴斯德菌预培养液在37℃的条件下接种到3毫升新鲜的BHI肉汤中，并以每分钟200转的速度摇动。将一定量的氮杂内酯类异构物平衡混合物在乙醇中溶解，并进行一系列两倍连续稀释。分别将两毫升连续稀释液与18毫升熔化的BHI细菌培养基混合并使之凝固。当溶血巴斯德菌的培养液的密度达到0.5麦克法兰德标准密度时，在37℃的条件下，其包括下述步骤控制复制器将约5微升的溶血巴斯德菌培养液接种到含有不同浓度的氮杂内酯类异构物平衡混合物的BHI培养基盘中，为时18小时。混合物的起始浓度为100-200微克/毫升。MIC为与未接种对照相比，等于能100%抑制多杀巴斯德氏菌的生长之混合物浓度。 最佳者，该微稀释检定系根据NCCLS指南M31-A,VOL. 19,NO. 11,"PERFORMANCE STANDARDS FOR ANITMICROBIAL DISK AND DILUTION SUSCEPTIBILITY TESTS FOR BACTERIA ISOLATED FROM ANIMALS," JUNE 1999(ISBN 1-56238-377-9)，使用阳离子调节木勒希顿肉汤实施的，该指南附于此作为参考。此分析物可以用来决定抗溶血巴斯德菌和多杀巴斯德氏菌化合物的最小抑制浓度。例如，根据此标准来测试异构物的平衡混合物的抗溶血巴斯德菌性(ATCC14003)，发现其最小抑制浓度为1微克/毫升。根据此标准来测试异构物的平衡混合物的抗多杀巴斯德氏菌性(ATCC43137)，最小抑制浓度为1微克/毫升。 检定Ⅳ 本发明医药组合物在活的机体内的活性能够经由传统的动物保护研究来确定，这对那些熟谙此艺者来说并不陌生。试验对象通常为小鼠。 小鼠一到，就将彼等装入笼子中(每笼10只)，在使用之前，使彼等适应环境至少48小时。动物接受0.5毫升3×10 3 CFU/毫升的细菌悬浮液(多杀巴斯德氏菌59A006菌株)腹膜内的接种。每一次试验至少含有3组非药物控制的小鼠，包括一只注射了免疫性试验0.1倍剂量的小鼠和两只注射免疫性剂量1倍的小鼠；也可以使用注射了10倍剂量的小鼠。总而言之，在特定的研究中，所有的小鼠在30-90分钟后都能接受免疫试验，特别是使用重复注射器(例如：一种Cornwa117注射器)来施药。在免疫试验开始30分钟后，向小鼠施以第一种医药组合物。如果在30分钟之后，并非所有的动物都接受了药物注射，可以让第二个人进行剂量给药。施药的方式有皮下注射和口服两种。皮下注射在颈后部难看的部位进行，而口服则经由给料针。在这两种情况下，每只小鼠的用药量为0.2毫升。在激发后30分钟、4小时和24小时向小鼠施药。在每一测试中，以同样的方式向小鼠施以已知功效的对照组合物。每天观察动物，记录下每组存活小鼠的数量。在激发后，多杀巴斯德氏菌模式监测持续96小时(4天)。 PD50是适当的剂量，使用此剂量，能使一组小鼠的50%避免因细菌性感染而死亡。在缺乏治疗时，细菌性感染将是致命的。 本发明医药组合物可以用来治疗人类、牲口、马、羊、猪、山羊、兔、猫、狗和其他需要这种治疗的哺乳动物。特别是，本发明医药组合物可以用来治疗牛呼吸系统疾病、猪呼吸系统疾病、肺炎、巴斯德氏菌病、球虫病、无形虫病以及感染性的角蛋白炎。医药组合物可以经由口服、肌肉方式、静脉方式、皮下方式、肠内方式、非经肠方式、局部方式、阴道内的方式或直肠方式进行施药。对于给牲口、猪或其他家养动物施药，可以将医药组合物放入饲料中或作为一服药剂口服。更佳的是，将医药组合物进行肌肉、静脉或皮下注射。在较佳具体实例中，医药组合物的施药量为每千克体重每天服用约0.5毫克到约20毫克异构物的平衡混合物。在更佳的实施例中，医药组合物的施药量的范围从1.25毫克/千克/天到约5.0毫克/千克/天不等。一天可以多次给药，持续给药约1到15天，1到5天更佳，合适的可重复施药。那些熟按此艺者不难意识到，剂量因治疗对象的种类、重量和身体条件不同而有所不同。个体对药物的反应以及施药方式也会不同。在一些情况下，低于前面所提到的施药量范围的最低标准的剂量可能对治疗有效；然而在另一些时候，需要使用更大剂量但不会造成任何有害的副作用。使用更大剂量的前提是，在一天中，要将大剂量先分成若干小剂量进行施药。