公开(公告)号：CN102552893A

公开(公告)日：2012-07-11

申请号：CN201110439688.X

申请日：2011-12-26

Applicant: 吉林大学

Inventor： 张西臣 ,  李建华 ,  李运娜 ,  宫鹏涛 ,  程柏淇 ,  张国才 ,  杨举 ,  李赫 ,  陈玉江 ,  任文陟

IPC: A61K39/012 ,  C12N15/66 ,  A61P33/02

Abstract: 本发明提供了一种鸡球虫ADF重组卡介苗，同时还提供了该疫苗的制备方法，获得鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊，提取RNA，反转录成cDNA，根据已克隆的柔嫩艾美耳球虫ADF基因序列的开放阅读框设计引物进行PCR，与PMD-18T载体连接进行克隆，测序鉴定正确后，酶切回收目的片段，再分别与用同种酶进行酶切反应的大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体PMV261和整合表达载体PMV361相连，连接正确的重组质粒转化到BCG中，经抗性筛选和PCR鉴定，获得阳性鸡柔嫩艾美耳球虫重组卡介苗。该活载体疫苗稳定性好，运输和保存较为容易，易于生产,产品不需纯化，可直接用于免疫保护试验.免去了蛋白质后处理的复杂工序，从而大大降低了成本，适宜于广大农村。

公开(公告)号：CN102552893B

公开(公告)日：2013-09-18

申请号：CN201110439688.X

申请日：2011-12-26

Applicant: 吉林大学

Inventor： 张西臣 ,  李建华 ,  李运娜 ,  宫鹏涛 ,  程柏淇 ,  张国才 ,  杨举 ,  李赫 ,  陈玉江 ,  任文陟

IPC: A61K39/012 ,  C12N15/66 ,  A61P33/02

Abstract: 本发明提供了一种鸡球虫ADF重组卡介苗，同时还提供了该疫苗的的制备方法，获得鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊，提取RNA，反转录成cDNA，根据已克隆的柔嫩艾美耳球虫ADF基因序列的开放阅读框设计引物进行PCR，与PMD-18T载体连接进行克隆，测序鉴定正确后，酶切回收目的片段，再分别与用同种酶进行酶切反应的大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达载体PMV261和整合表达载体PMV361相连，连接正确的重组质粒转化到BCG中，经抗性筛选和PCR鉴定，获得阳性鸡柔嫩艾美耳球虫重组卡介苗。该活载体疫苗稳定性好，运输和保存较为容易，易于生产,产品不需纯化，可直接用于免疫保护试验.免去了蛋白质后处理的复杂工序，从而大大降低了成本，适宜于广大农村。