一种固液交替培养诱导落羽杉高效体胚发生的方法

    公开(公告)号:CN114788496B

    公开(公告)日:2023-07-21

    申请号:CN202210364144.X

    申请日:2022-04-07

    IPC分类号: A01H4/00

    摘要: 本发明公开了一种固液交替培养诱导落羽杉高效体胚发生的方法,以落羽杉子叶胚为外植体,接入固体胚性愈伤组织诱导培养基中诱导出胚性愈伤组织,然后再进行固体增殖培养;完成后,转入继代培养基进行液体悬浮继代培养一次以上,将获得的悬浮液涂于滤纸上,然后将滤纸移至体胚诱导培养基诱导出成熟体胚,并接种于光照培养室组培瓶中,以成苗培养基继续培养得到落羽杉小苗。本发明首次建立了落羽杉的体胚发生体系,操作步骤简单,成本低,能够快速获得落羽杉体细胞胚胎,高效繁育大量落羽杉苗木,也有利于后期建立落羽杉的遗传转化体系。

    一种落羽杉胚性愈伤组织的超低温冷冻保存方法

    公开(公告)号:CN115176708A

    公开(公告)日:2022-10-14

    申请号:CN202210971775.8

    申请日:2022-08-12

    IPC分类号: A01H4/00

    摘要: 本发明公开了一种落羽杉胚性愈伤组织的超低温冷冻保存方法,属于植物组培技术领域。本发明具体方法包括:挑取并轻轻按压落羽杉胚性愈伤组织,加入液体培养基,制备为胚性愈伤组织细胞悬浮液;脱水剂和冷冻保护剂处理悬浮液;对悬浮液进行程序降温冷冻;冷冻降温完成后保存至液氮环境中;从液氮中取出冷冻材料,解冻后进行恢复生长,检测愈伤组织细胞活性。本发明所述的超低温冷冻保存方法,操作步骤简单,处理液配方简单且成本低,为后期中山杉优良品系胚性愈伤组织的保存提供了技术条件。

    一种固液交替培养诱导落羽杉高效体胚发生的方法

    公开(公告)号:CN114788496A

    公开(公告)日:2022-07-26

    申请号:CN202210364144.X

    申请日:2022-04-07

    IPC分类号: A01H4/00

    摘要: 本发明公开了一种固液交替培养诱导落羽杉高效体胚发生的方法,以落羽杉子叶胚为外植体,接入固体胚性愈伤组织诱导培养基中诱导出胚性愈伤组织,然后再进行固体增殖培养;完成后,转入继代培养基进行液体悬浮继代培养一次以上,将获得的悬浮液涂于滤纸上,然后将滤纸移至体胚诱导培养基诱导出成熟体胚,并接种于光照培养室组培瓶中,以成苗培养基继续培养得到落羽杉小苗。本发明首次建立了落羽杉的体胚发生体系,操作步骤简单,成本低,能够快速获得落羽杉体细胞胚胎,高效繁育大量落羽杉苗木,也有利于后期建立落羽杉的遗传转化体系。

    一种中山杉品种406叶肉原生质体分离、纯化及高效转化的方法

    公开(公告)号:CN107267549B

    公开(公告)日:2021-01-05

    申请号:CN201710547595.6

    申请日:2017-07-06

    IPC分类号: C12N15/82 C12N5/04

    摘要: 本发明公开了一种中山杉品种406叶肉原生质体分离、纯化及高效转化的方法,包括:1)以中山杉生长30天长势良好的组培苗幼嫩叶片为材料,对材料进行30h的黑暗预处理;2)对叶肉原生质体进行分离和纯化;3)从15~20mL过夜培养菌液抽提50~80μg质粒,质粒为载体p2FGW7.0;4)PEG介导进行原生质体转化。本发明的中山杉品种406叶肉原生质体分离、纯化及高效转化的方法,其操作简单易行,除可以获得大量、完整、纯净的中山杉叶肉原生质体外,还可以达到高达80%的质粒转化率。从而解决了无法深入研究中山杉基因功能的难题,也为其他针叶树种原生质体瞬时表达体系建立提供一定的参考及借鉴,将在林木基因工程领域有重要的应用价值。

    一种落羽杉根,茎,叶原生质体分离、纯化及瞬时高效转化的方法

    公开(公告)号:CN110669718A

    公开(公告)日:2020-01-10

    申请号:CN201910948163.5

    申请日:2019-09-30

    IPC分类号: C12N5/04 C12N15/82

    摘要: 本发明公开了一种落羽杉根,茎,叶原生质体分离、纯化及瞬时高效转化方法,包括以下步骤:1)选择生长出1-3轮叶片的落羽杉幼苗,避光培养24h;先用75%酒精清洗1遍,再用去离子水清洗3遍,然后刀片分离落羽杉幼苗的叶片,茎段以及根部;2)使用纤维素酶和果胶酶将落羽杉根,茎,叶酶解成原生质体,并对所得到的原生质体进行分离、纯化和预处理;3)以不同组织原生质体为受体,利用PEG介导转化法将含有外源基因的瞬时表达载体转入原生质体中,经培养,使外源基因在原生质体中表达。该方法操作简单易行,可以获得大量、完整、纯净的落羽杉根,茎,叶原生质体,并且转化效率均高达50%以上,为落羽杉基因瞬时表达检测,原生质体融合等提供技术依据。

    一种富集培养滑刃属食真菌线虫的方法

    公开(公告)号:CN105766813B

    公开(公告)日:2018-10-09

    申请号:CN201610228429.5

    申请日:2016-04-13

    IPC分类号: A01K67/033

    摘要: 本发明属于生物技术领域,具体为一种富集培养滑刃属食真菌线虫的方法。具体包括:(1)滑刃属食真菌线虫的分离;(2)滑刃属食真菌线虫的鉴定;(3)滑刃属食真菌线虫的表面消毒;(4)滑刃属食真菌线虫的富集培养。本发明的方法简单易行,滑刃属食真菌线虫繁殖成活率高,线虫个体质量好,遗传性变化小,管理方便,可以有效获得大量纯培养的滑刃属食真菌线虫,为研究滑刃属食真菌线虫在整个土壤食物链的关键作用及其与真菌的相互作用对植物生长的影响提供技术支持。

    一种富集培养滑刃属食真菌线虫的方法

    公开(公告)号:CN105766813A

    公开(公告)日:2016-07-20

    申请号:CN201610228429.5

    申请日:2016-04-13

    IPC分类号: A01K67/033

    摘要: 本发明属于生物技术领域,具体为一种富集培养滑刃属食真菌线虫的方法。具体包括:(1)滑刃属食真菌线虫的分离;(2)滑刃属食真菌线虫的鉴定;(3)滑刃属食真菌线虫的表面消毒;(4)滑刃属食真菌线虫的富集培养。本发明的方法简单易行,滑刃属食真菌线虫繁殖成活率高,线虫个体质量好,遗传性变化小,管理方便,可以有效获得大量纯培养的滑刃属食真菌线虫,为研究滑刃属食真菌线虫在整个土壤食物链的关键作用及其与真菌的相互作用对植物生长的影响提供技术支持。