-
公开(公告)号：CN114316037A
公开(公告)日：2022-04-12
申请号：CN202210011223.2
申请日：2022-01-05
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 郑海学 , 杨洋 , 秦晓东 , 茹毅 , 张伟 , 杨帆 , 曹伟军 , 朱紫祥 , 卢炳州 , 赵东梅 , 任蕊芳 , 吴秀萍 , 郝荣增 , 刘华南 , 李亚军 , 吴国华 , 李丹 , 田宏 , 张克山 , 毛箬青
IPC: C07K16/10 , C12N15/13 , C12N5/20 , G01N33/569 , G01N33/577 , G01N33/543 , G01N33/58
Abstract: 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种O型口蹄疫病毒结构蛋白的抗体、制备方法及应用。本发明以O型口蹄疫病毒146s作为免疫原，免疫Balb/c小鼠，经细胞融合，获得一株高效分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞系，并获得了一种鼠单克隆抗体m19。间接免疫荧光试验表明所述单克隆抗体m19对O型不同谱系毒株均具有很好的反应性，而不和A型不同谱系毒株反应。利用单克隆抗体m19和O型结构蛋白兔抗血清建立了O型口蹄疫病毒结构蛋白固相竞争ELISA检测试剂盒，相较于现有抗体，显著提高了检测结果的灵敏度和特异性，适用于O型口蹄疫感染或灭活疫苗免疫后结构蛋白抗体的检测，同时，也是一种监测口蹄疫非免疫地区感染情况的新方法。
-
公开(公告)号：CN111849979B
公开(公告)日：2022-02-08
申请号：CN202010576529.3
申请日：2020-06-22
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明属于基因工程领域，具体涉及一种靶向敲除RPSA基因的sgRNA及RPSA基因敲除细胞系的构建方法。本发明设计了一种特异性靶向RPSA基因的sgRNA；所述的sgRNA能够特异性靶向RPSA基因，应用CRISPR‑Cas9技术实现了对宿主细胞中RPSA基因的完全敲除，敲除效率高；本发明还提供了一种通过CRISPR‑Cas9技术将所述sgRNA转染于宿主细胞，构建RPSA基因敲除细胞系的方法；敲除宿主细胞中RPSA基因不仅能够促进FMDV病毒的复制，可用于提高FMDV疫苗的生产量和抗原表达量；而且还意外的发现，敲除宿主细胞中RPSA基因能够显著抑制塞内卡谷病毒在细胞内的复制；为进一步研究RPSA基因在细胞内调控病原微生物复制的分子机制提供研究工具和材料。
-
公开(公告)号：CN112076314B
公开(公告)日：2021-11-23
申请号：CN202011020241.4
申请日：2020-09-24
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 茹毅 , 刘华南 , 张贵财 , 杨帆 , 李丹 , 郭建宏 , 何继军 , 张娇燕 , 李亚军 , 马坤 , 伍春平 , 郝荣增 , 卢炳州 , 田宏 , 朱紫祥 , 张克山 , 曹伟军 , 刘永杰 , 靳野 , 马旭升 , 党文
Abstract: 本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种A型口蹄疫亚单位疫苗及其制备方法和应用。本发明以我国2013年A型口蹄疫病毒流行株(A/GDMM/2013)的三种结构蛋白VP0、VP3和VP1的氨基酸序列为基础进行优化设计，并借助小泛素样融合蛋白(SUMO)，筛选出单个质粒在大肠杆菌中同时高效、均一、可溶性表达这三种结构蛋白，且三种病毒结构蛋白成功在体外自组装；最终获得的目标蛋白约占菌体总蛋白30％以上，纯化后目标蛋白产量最高可达150mg/L。用本发明方法制备的口蹄疫疫苗，对我国A型口蹄疫流行毒具有良好的保护作用，疫苗最小全保护免疫剂量可低至20μg/头份。
-
公开(公告)号：CN113416768A
公开(公告)日：2021-09-21
申请号：CN202110761133.0
申请日：2021-07-06
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/6851 , C12N15/113 , C12N15/55 , C12N5/10 , A61K48/00 , A61K31/713 , A61P31/14 , C12R1/91
Abstract: 本发明属于生物基因工程技术领域，具体涉及一种PRKRA基因作为靶点在抑制小反刍兽疫病毒复制中的应用。本发明首先发现通过抑制或沉默宿主PRKRA基因，能够抑制小反刍兽疫病毒的复制，可作为靶点用于制备抑制小反刍兽疫病毒复制的药物；其次，以PRKRA基因为靶点，本发明设计了小干扰RNA，所述小干扰RNA能够干扰小反刍兽疫病毒复制，可用于制备抑制小反刍兽疫病毒的复制的药物；并且，本发明提供了一种特异性靶向PRKRA基因的sgRNA，所述的sgRNA能够特异性靶向PRKRA基因，结合CRISPR‑Cas9技术实现了PRKRA基因的完全敲除，获得的单克隆细胞系PRKRA‑KOs对PPRV具有抗性表型，能够显著抑制PPRV在细胞内的复制，为进一步研究PRKRA基因在细胞内调控病原微生物复制的分子机制提供研究工具和材料。
-
公开(公告)号：CN106916832B
公开(公告)日：2021-01-05
申请号：CN201710256371.X
申请日：2017-04-19
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/42 , C12N7/00 , C12N15/85 , A61K39/135 , A61P31/14
Abstract: 本发明涉及一种分离的口蹄疫病毒核酸及其在制备口蹄疫病毒重组核酸和/或口蹄疫重组疫苗株中的用途、一种口蹄疫病毒重组核酸、包含所述重组核酸的口蹄疫重组病毒、由所述重组核酸编码的口蹄疫重组病毒、包含所述口蹄疫重组病毒的口蹄疫重组疫苗株、一种制备所述口蹄疫重组病毒的方法、由所述方法制备得到的口蹄疫重组疫苗以及所述口蹄疫重组疫苗在制备用于预防和/或控制动物口蹄疫疾病的药物中的用途。
-
Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111996202A
公开(公告)日：2020-11-27
申请号：CN202010212908.4
申请日：2020-03-24
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 郑海学 , 杨帆 , 朱紫祥 , 魏婷 , 曹伟军 , 刘华南 , 郑敏 , 张伟 , 田宏 , 张克山 , 刘永杰 , 党文 , 马旭升 , 李丹 , 茹毅 , 何继军 , 郭建宏 , 刘湘涛
IPC: C12N15/41 , C12N15/42 , C12N7/01 , C12N15/85 , A61K39/295 , A61K39/125 , A61K39/135 , A61P31/14
Abstract: 本发明提供一种重组O型口蹄疫病毒VP1基因的塞内卡重组病毒、重组疫苗株及其制备方法和应用，涉及基因工程技术领域。本发明通过对SVV/FJ/001株进行基因缺失突变改造，同时在SVA cDNA中融合进O型口蹄疫病毒的VP1基因，得到塞内卡重组病毒，该重组病毒能够表达融合进的外源FMDV VP1基因，且表达产物具有良好的反应原性；制备得到的疫苗株抗原产能高，致病性显著降低甚至对猪无致病性，灭活疫苗免疫动物后不仅能激发SVA的免疫应答，而且能产生针对融合基因的免疫活性，该疫苗株显著提高了生物安全性，可用于塞内卡病毒及一种或多种非塞内卡病毒的防控。
-
公开(公告)号：CN111394389A
公开(公告)日：2020-07-10
申请号：CN202010212435.8
申请日：2020-03-24
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/86 , C12N15/66 , C12N7/01 , A61K39/125 , A61P31/14
Abstract: 本发明提供了一种针对正链RNA病毒的单质粒拯救系统及基于该系统的塞内卡病毒感染性克隆及构建方法和应用，涉及基因工程技术领域。本发明提供了针对正链RNA病毒的单质粒拯救系统以及利用该拯救系统可定向设计SVA反向重组疫苗及构建SVA定向突变毒株在病毒基因功能、病毒变异及致病机制等研究中的应用。本发明利用聚合酶I和聚合酶II启动子、终止子、核酶等元件构建的单质粒塞内卡病毒拯救系统，实现了在质粒水平上编辑病毒基因组，为病毒定向设计、构建和拯救提供了技术平台。
-
公开(公告)号：CN110862968A
公开(公告)日：2020-03-06
申请号：CN201911044827.1
申请日：2019-10-30
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及MAP3K8基因敲除PK-15细胞系的构建方法及其应用。MAP3K8基因敲除的PK-15细胞系PK-15-KO-MAP3K8的保藏编号为CCTCC NO:C2019176。该细胞系的构建方法包括1：根据猪源MAP3K8基因序列分别设计两条sgRNA，将双链sg RNA与酶切后的lentiGuide-EGFP载体连接得到重组慢病毒表达质粒lentiGuide-EGFP-MAP3K8-sg RNA；2：将重组慢病毒表达质粒、病毒包装辅助质粒共转染PK-15细胞；3：收集病毒液，过滤、超速离心浓缩纯化病毒；4：用感染复数MOI=30的慢病毒感染PK-15细胞，然后用超速流式细胞分选系统进行单细胞分选；5：将分选得到的单克隆细胞进行扩大培养并测序鉴定。该细胞系能够促进FMDV和SVV增殖，提高病毒产量，可用于FMDV和SVV疫苗株的大规模细胞化培养和生产，并可为研究MAP3K8在病毒感染过程中的作用机制提供有力工具。
-
公开(公告)号：CN108504654A
公开(公告)日：2018-09-07
申请号：CN201810330296.1
申请日：2018-04-13
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种抗塞尼卡谷病毒VHH抗体的酵母cDNA文库及其构建方法和用途，本发明从塞尼卡谷病毒灭活疫苗免疫的骆驼外周血中分离得到淋巴细胞，通过RT-PCR的方法得到抗塞尼卡谷病毒VHH抗体的cDNA片段，将VHH抗体的cDNA片段与pGADT7-Rec共转化酵母感受态细胞，得到抗塞尼卡谷病毒VHH抗体的酵母cDNA文库。结果表明该文库的滴度约为7.2×106cfu/ml，文库的重组率为100％。进一步对文库进行初步功能性鉴定，表明所构建的酵母文库中存在具有抗塞尼卡谷病毒的VHH抗体。本发明的提出为筛选抗塞尼卡谷病毒VHH抗体提供了平台，并且为塞尼卡谷的早期治疗和诊断提供了新的方法。
-
公开(公告)号：CN107894508A
公开(公告)日：2018-04-10
申请号：CN201710771982.8
申请日：2017-08-31
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: G01N33/68 , G01N33/569 , G01N33/532
CPC classification number: G01N33/6854 , G01N33/532 , G01N33/56983
Abstract: 本发明公开了一种用于塞内卡病毒抗体检测的固相竞争ELISA试剂盒及其应用。所述的试剂盒包括塞内卡病毒灭活抗原包被的酶标板以及HRP标记的塞内卡病毒兔抗IgG。本发明使用HRP标记兔抗IgG，替代传统ELISA中的一抗和二抗，简化了操作步骤。同时通过改变包被稳定工艺将SVV灭活抗原包被到固相载体表面，改变酶标抗体稀释液的配制工艺，可使酶标抗体工作液稳定保存而不改变其活性和效价，建立了特异检测SVV抗体的固相竞争ELISA试剂盒及其检测方法。本发明的提出弥补了SVV ELISA抗体检测的空缺，克服了现有VNT检测SVV抗体检测中重复性和敏感性低、操作程序繁琐的问题，为SVV抗体检测提供了一种有效的技术手段。
-
-
-
-
-
-
-
-
-
Search Results
159
records
(took 0.041 seconds)
