公开(公告)号：CN119410707A

公开(公告)日：2025-02-11

申请号：CN202411250514.2

申请日：2024-09-06

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴益东 ,  李林 ,  杨亦桦 ,  王兴亮 ,  施雨 ,  管放

IPC: C12N15/85 ,  A01K67/34 ,  C12N15/57 ,  C12N15/113 ,  C12Q1/6888 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明涉及用于构建棉铃虫雄性不育系的方法及涉及的转化事件。一种构建棉铃虫雄性不育系的方法。将含有Chr16‑Vasa‑Cas9转化事件的棉铃虫与含有Chr5‑U6‑S2sgRNA转化事件的棉铃虫杂交，获得共表达Cas9和sgRNA的杂交F1代棉铃虫后，棉铃虫表现出雄性不育表型，同时没有其他适合度代价，即其交配成功率、交配时间和产卵量均没有发生显著变化。本发明一方面为构建棉铃虫雄性不育系提供了两种优选的转化事件，为开发无抗性风险且绿色环保的棉铃虫高效防治策略奠定了坚实的基础；同时提供了对这两种转化事件进行分子鉴定的方法，为对其进行身份识别以及对转基因棉铃虫进行追溯和监管提供了重要的科学依据。

公开(公告)号：CN113293215A

公开(公告)日：2021-08-24

申请号：CN202010112224.7

申请日：2020-02-24

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴益东 ,  王兴亮 ,  管放 ,  杨亦桦 ,  武淑文

IPC: C12Q1/6888 ,  C12N15/11 ,  C12N15/12

Abstract: 本发明公开了草地贪夜蛾对苏云金芽孢杆菌Bt Cry1F毒素抗性基因的分子检测方法。该方法利用SEQ ID NO.1所示的特异性正向引物F和SEQ ID NO.2所示的特异性反向引物R对草地贪夜蛾基因组DNA模板进行PCR扩增，对PCR纯化产物直接测序，根据测序色谱图鉴定草地贪夜蛾个体腺苷三磷酸(ATP)结合盒转运蛋白C2基因第15号外显子是否发生了12‑bp的碱基插入，且一次性区分出所述抗性基因的敏感纯合子、抗性杂合子和抗性纯合子。该方法具有快速简便、准确性高的优点，专用于草地贪夜蛾对Bt Cry1F毒素抗性的分子检测和早期预警。

公开(公告)号：CN106939332A

公开(公告)日：2017-07-11

申请号：CN201610005744.1

申请日：2016-01-04

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴益东 ,  王兴亮 ,  王敬 ,  杨亦桦 ,  武淑文

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种快速鉴定小菜蛾烟碱型乙酰胆碱受体基因突变的方法及其专用引物。通过检测烟碱型乙酰胆碱受体α6亚基基因第十二号外显子区域是否发生9个碱基的缺失突变从而判定待测小菜蛾对多杀霉素的抗性，发生了所述的9个碱基的缺失突变的小菜蛾具有对多杀霉素抗性，未发生所述的9个碱基的缺失突变的小菜蛾不具备对多杀霉素抗性。该方法具有快速简便、准确性高的优点，可用于监测小菜蛾田间种群对多杀霉素的抗性等位基因频率和抗药性发生发展动态，为制订小菜蛾化学治理方案提供重要依据，为延缓多杀霉素类杀虫剂抗性发展具有重要意义。

公开(公告)号：CN103923175B

公开(公告)日：2016-03-02

申请号：CN201410155233.9

申请日：2014-04-17

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 杨亦桦 ,  武淑文 ,  吴益东

IPC: C07K7/06 ,  C12Q1/37 ,  C12R1/07

Abstract: 本发明公开了一种用于检测作用于Cry1A类原毒素的胰蛋白酶活力的荧光底物及其应用。该荧光底物组成为：荧光淬灭基团-Gly-GLy-Glu-Arg-Ile-Glu-Thr-Gly-Glu-荧光基团。本发明所述的荧光多肽底物R28在检测直接作用于活化苏云菌芽孢杆菌Cry1A类原毒素的昆虫中肠胰蛋白酶活力中的应用。与传统的蛋白酶检测方法相比，本发明荧光底物用于检测直接作用于活化苏云菌芽孢杆菌Cry1A类原毒素的昆虫中肠胰蛋白酶活力具有明确的特异性和针对性，检测只作用于相应荧光底物R28的胰蛋白酶活力，酶解反应中产生的强烈的荧光信号，大大提高了检测的灵敏度。

公开(公告)号：CN103923175A

公开(公告)日：2014-07-16

申请号：CN201410155233.9

申请日：2014-04-17

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 杨亦桦 ,  武淑文 ,  吴益东

IPC: C07K7/06 ,  C12Q1/37 ,  C12R1/07

Abstract: 本发明公开了一种用于检测作用于Cry1A类原毒素的胰蛋白酶活力的荧光底物及其应用。该荧光底物组成为：荧光淬灭基团-Gly-GLy-Glu-Arg-Ile-Glu-Thr-Gly-Glu-荧光基团。本发明所述的荧光多肽底物R28在检测直接作用于活化苏云菌芽孢杆菌Cry1A类原毒素的昆虫中肠胰蛋白酶活力中的应用。与传统的蛋白酶检测方法相比，本发明荧光底物用于检测直接作用于活化苏云菌芽孢杆菌Cry1A类原毒素的昆虫中肠胰蛋白酶活力具有明确的特异性和针对性，检测只作用于相应荧光底物R28的胰蛋白酶活力，酶解反应中产生的强烈的荧光信号，大大提高了检测的灵敏度。