公开(公告)号：CN108410886B

公开(公告)日：2020-11-13

申请号：CN201810165607.3

申请日：2018-02-28

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 夏涛 ,  王培强 ,  张铃杰 ,  代新龙 ,  刘亚军 ,  高丽萍

IPC: C12N15/53 ,  C12N15/82 ,  C12N5/10 ,  A01H5/00 ,  A01H6/82 ,  C07D311/40 ,  G01N30/02

Abstract: 本发明公开了一种儿茶素中间体合成及检测方法，包括从茶树中克隆得到CsANRa基因，构建双元表达载体后，利用转化到植物体内获得转基因植株，然后以80％甲醇与盐酸的混合溶液为提取液，对转基因植株中黄烷‑3‑醇中间体等多酚类物质进行提取，获得儿茶素中间体，最后通过UPLC‑QQQ‑MS/MS对儿茶素中间体产物进行定性和定量鉴定。与现有技术相比，本发明方法操作简单，所用的有机溶剂价格低廉，成本低；通过本方法获得的儿茶素中间体中不含儿茶素，相对比较单一，适合用来制备纯度较高的儿茶素中间体，这也是首次报道的儿茶素中间体合成和检测方法。

公开(公告)号：CN108410886A

公开(公告)日：2018-08-17

申请号：CN201810165607.3

申请日：2018-02-28

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 夏涛 ,  王培强 ,  张铃杰 ,  代新龙 ,  刘亚军 ,  高丽萍

IPC: C12N15/53 ,  C12N15/82 ,  C12N5/10 ,  A01H5/00 ,  A01H6/82 ,  C07D311/40 ,  G01N30/02

Abstract: 本发明公开了一种儿茶素中间体合成及检测方法，包括从茶树中克隆得到CsANRa基因，构建双元表达载体后，利用转化到植物体内获得转基因植株，然后以80％甲醇与盐酸的混合溶液为提取液，对转基因植株中黄烷-3-醇中间体等多酚类物质进行提取，获得儿茶素中间体，最后通过UPLC-QQQ-MS/MS对儿茶素中间体产物进行定性和定量鉴定。与现有技术相比，本发明方法操作简单，所用的有机溶剂价格低廉，成本低；通过本方法获得的儿茶素中间体中不含儿茶素，相对比较单一，适合用来制备纯度较高的儿茶素中间体，这也是首次报道的儿茶素中间体合成和检测方法。

公开(公告)号：CN105087613A

公开(公告)日：2015-11-25

申请号：CN201510409303.3

申请日：2015-07-10

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 高丽萍 ,  代新龙

IPC: C12N15/54 ,  C12N9/10 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/60

Abstract: 黄酮醇7-O-葡萄糖基转移酶CsUGT75L12基因及其编码蛋白和应用。本发明公开了一种能高效转化黄酮醇生成黄酮醇7-O-葡萄糖苷的UDP-葡萄糖基转移酶基因。该基因是从茶叶鲜叶中分离获得的，为一种黄酮醇7-O-葡萄糖基转移酶，该基因被UGT糖基转移酶命名法委员会命名为CsUGT75L12。它克隆了一个全长为1826bp的cDNA序列，ORF序列为1536bp，可以编码含512个氨基酸序列的蛋白质肽链。通过构建重组质粒，实现了CsUGT75L12基因在大肠杆菌中的重组表达，并得到纯化的重组蛋白。在体外，重组蛋白可以高效地将黄酮醇化合物转化成黄酮醇7-O-葡萄糖苷化合物，转化率达到85.2％。本发明为实现黄酮醇糖苷类物质商品化生产提供了代谢工程基础。