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公开(公告)号：CN104198713A
公开(公告)日：2014-12-10
申请号：CN201410450554.1
申请日：2014-09-05
申请人： 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
IPC分类号： G01N33/577 , G01N33/569 , G01N21/78
CPC分类号： G01N33/56983 , G01N21/78
摘要： 本发明公开了一种快速检测蓟马体内番茄斑萎病毒的方法，将待测的1头或几头蓟马放置到画好分隔的硝酸纤维素膜上，加2μl样品处理缓冲液，用移液枪头将蓟马磨碎于缓冲液中，依次处理不同虫体样品，同样吸取2μl阳性和阴性对照液点在硝酸纤维素膜上；待膜干燥后，用PBST缓冲液配制的5%脱脂奶粉封闭1h,再加入封闭液稀释的一抗培育1h,之后洗膜3次；加入封闭液稀释的二抗培育1h，再洗膜3次；加入显色液显色15min，弃去显色液加入蒸馏水终止显色反应，即可进行结果分析。本发明操作方便、快速、测定结果有良好的稳定性、重现性和准确性，能满足蓟马体内番茄斑萎病毒的检测需要，为尽量避免番茄斑萎病毒的危害奠定了基础。
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公开(公告)号：CN103740865A
公开(公告)日：2014-04-23
申请号：CN201410034604.8
申请日：2014-01-25
申请人： 云南省烟草农业科学研究院 , 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
CPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6804 , C12Q2537/143
摘要： 本发明公开了一种烟草花叶型病株中烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒、烟草脉带花叶病毒3种病毒的检测方法。通过烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒、烟草脉带花叶病毒特异性混合抗体诱捕病样中病毒，不必提取样品总RNA进行随机引物逆转录和特异性病毒引物复合PCR反应，专门针对烟草生产过程对烟草中上部叶片为害较为严重且不能从症状区分病原而建立的一种单管同时检测3种病毒中的1、2或3种不同病毒组合的方法，检测时间仅需5小时。本方法将快速、特异的免疫沉淀与灵敏的复合RT-PCR结合，同时设置健康烟草随机引物cDNA产物和相应病毒PCR特异片段阳性质粒作为阴、阳性对照，从而快速、准确、灵敏的检测田间烟草植株样品、抗病毒材料及田间环境疑似侵染源等。
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公开(公告)号：CN101824490A
公开(公告)日：2010-09-08
申请号：CN201010172289.7
申请日：2010-05-14
申请人： 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
摘要： 本发明提供了一种水稻矮缩病毒的快速检测方法，其步骤包括通过水稻矮缩病毒抗体特异捕获水稻矮缩病毒、高温变性获得病毒RNA作为模板、利用水稻矮缩病毒特异性引物进行一步法反转录聚合酶链式反应one step RT-PCR、琼脂糖凝胶电泳检测目的片段；该方法利用抗体的高效价及特异性，可特异快速的获得目的片段，为研究病毒的分子变异而进行的基因组序列扩增提供了快捷特异的方法，从而完善了免疫捕获RT-PCR的技术。
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公开(公告)号：CN1611940A
公开(公告)日：2005-05-04
申请号：CN200410033666.3
申请日：2004-04-15
IPC分类号： G01N33/53 , G01N33/531 , G01N1/34
摘要： 本发明涉及一种马铃薯X病毒(Potato virus X，PVX)云南分离物三抗体夹心酶联免疫吸附测定(TAS－ELISA)检测试剂盒及其制备方法，属于酶学或生物学装置领域。本发明试剂盒包含阳性对照、阴性对照、PVX多克隆抗体、PVX单克隆抗体、酶标抗体及其它材料和药品，其中，PVX多克隆抗体在分离提纯PVX云南分离物后，通过家兔免疫分离血清得到；PVX单克隆抗体在分离提纯PVX云南分离物后，通过小鼠免疫、细胞融合、克隆纯化得到。本发明制备的TAS－ELISA检测试剂盒检测灵敏度达到0.01ng/ml，与电镜检测结果比较准确率相符，比间接ELISA和DAS－ELISA检测灵敏度提高100倍。
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公开(公告)号：CN115873990A
公开(公告)日：2023-03-31
申请号：CN202211354813.1
申请日：2022-11-01
申请人： 贵州省烟草公司黔西南州公司 , 贵州省烟草科学研究院 , 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
摘要： 本发明公开了一种检测烟草病毒的引物组、试剂盒及方法。所述引物组由引物对A、引物对B、引物对C、引物对D四对中的一对或多对组成；所述引物组A由序列表的序列1至序列2所示的单链DNA分子组成的引物对；所述引物组B由序列表的序列3至4所示的单链DNA分子组成的引物对；所述引物组C由序列表的序列5至6所示的单链DNA分子组成的引物对；所述引物组D由序列表的序列7至8所示的单链DNA分子组成的引物对；本发明省略了单一病毒引物逆转录合成cDNA第一链和病毒核苷酸序列测定与分析等步骤，利用多重PCR的快速和灵敏性获得目的片段，为大量、快速、准确、灵敏检测烟草等植株样品建立了一种科学的方法。
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公开(公告)号：CN114075561A
公开(公告)日：2022-02-22
申请号：CN202111393950.1
申请日：2021-11-23
申请人： 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
摘要： 本发明属于生物化学与分子生物学技术领域，具体涉及一种大批量、快速研磨植物组织的方法。本发明将植物组织样品和灭菌的小球放入灭菌的离心管中，封闭离心管口，置于含有液氮的耐低温容器中，封闭耐低温容器口；静置1～2min后，倒出液氮，再封闭耐低温容器口，摇甩耐低温容器若干次，得研磨样品。实施例结果表明，本发明研磨方法样品损耗量小，操作时间短，简单方便，实用性强，可避免样品交叉污染，工作效率高，技术优势，提取后所得的DNA或RNA的纯度和浓度较高，提取得到的RNA中没有蛋白质、酚类及DNA的污染，提取得到的DNA中没有蛋白质、酚类及RNA的污染。
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公开(公告)号：CN113481329A
公开(公告)日：2021-10-08
申请号：CN202110838783.0
申请日：2021-07-23
申请人： 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
摘要： 本发明公开了一种同步检测番茄中五种重要病毒病原的方法，所述的五种重要病毒病原为番茄褐色皱纹果病毒、番茄花叶斑驳病毒、南方番茄病毒、番茄褪绿病毒、番茄斑萎病毒。本发明应用多引物复合反转录聚合酶链式反应（RT‑PCR）结合，通过提取植物总RNA、随机引物合成不同种类病毒cDNA第一链、5种病毒特异引物多重复合PCR检测，省略了单一病毒引物逆转录合成cDNA第一链和病毒核苷酸序列测定与分析等步骤，利用多重PCR的快速和灵敏性获得目的片段，为大量、快速、准确、灵敏检测各类番茄病样建立了一种科学的方法。
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公开(公告)号：CN112029907A
公开(公告)日：2020-12-04
申请号：CN202010918969.2
申请日：2020-09-04
申请人： 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
摘要： 本发明公开了一种同步检测花毛茛中五种重要病毒病原的方法，所述的五种重要病毒病原为花毛茛轻花叶病毒、花毛茛隐症病毒、花毛茛白斑驳病毒、花毛茛花叶病毒和花毛茛叶片皱缩病毒。本发明应用通过提取植物总RNA或病毒RNA、随机引物合成不同种类病毒cDNA第一链、5种病毒特异引物多重复合PCR检测，省略了单一病毒引物逆转录合成cDNA第一链和病毒核苷酸序列测定与分析等步骤，利用多重PCR的快速和灵敏性获得目的片段，为大量、快速、准确、灵敏检测各类花毛茛病毒病样品建立了一种科学的方法。
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公开(公告)号：CN111424118A
公开(公告)日：2020-07-17
申请号：CN202010332050.5
申请日：2020-04-24
申请人： 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
摘要： 本发明公开了一种西番莲病毒病原多重复合PCR检测方法，包括以下步骤：提取样本总RNA；设计用于扩增西番莲中重要病毒病原黄瓜花叶病毒、芜菁花叶病毒、西番莲果实木质化病毒、夜来香花叶病毒4种病毒基因片段的特异性引物；在无RNA酶的PCR管中加入提取的西番莲植物总RNA样品1~3μg高温变性获得病毒RNA作为模板进行逆转录反应合成cDNA第一链；利用单管多重PCR扩增反应得到PCR扩增产物；将获得的PCR扩增产物进行2.0%琼脂糖凝胶电泳检测。本发明应用黄瓜花叶病毒、芜菁花叶病毒、西番莲果实木质化病毒、夜来香花叶病毒4种病毒特异引物可以同时在单PCR管中检测4种西番莲主要病毒，特异性、简便性、灵敏度和准确性较单一病毒或两种病毒检测有较大的优势。
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公开(公告)号：CN109929812A
公开(公告)日：2019-06-25
申请号：CN201910116031.6
申请日：2019-02-15
申请人： 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
摘要： 本发明公开了一种马铃薯品种合作88中马铃薯A病毒毒株及其构建方法与应用。所述的马铃薯品种合作88中马铃薯A病毒毒株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日：2018年12月14日，保藏编号：CGMCC No.16990。马铃薯品种合作88中马铃薯A病毒（Potato virus A，PVA）毒株建立包括样品采集；病原鉴定；合作88品种中单一马铃薯A病毒组培苗建立以及应用。所述的样品采集包括病害调查、样品采集、保存；所述的建立包括通过带毒薯块幼芽在培养基中诱导为组培苗、在一定温度条件下保存该带有PVA合作88品种组培苗；应用为所述的马铃薯品种合作88中马铃薯A病毒毒株在检测中的应用。
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