公开(公告)号：CN111534547A

公开(公告)日：2020-08-14

申请号：CN202010426111.4

申请日：2020-05-19

申请人： 扬州大学

发明人： 叶建强 ,  隆玉兰 ,  秦爱建 ,  张伟 ,  王伟康 ,  谢泉 ,  张建军 ,  李拓凡 ,  万志敏 ,  邵红霞

IPC分类号： C12N15/866 ,  C12N15/70

摘要： 本发明涉及一种表达血清4型禽腺病毒纤突蛋白F2的重组杆状病毒的构建方法，包括以下步骤：（1）构建FAdV-4-F2基因重组杆状病毒表达载体；（2）表达重组FAdV-4蛋白的杆状病毒包装和传代；（3）将携带有FAdV-4-F2基因的杆状病毒基因组转染进sf9细胞，27℃培养箱中培养5-7天，观察细胞病变情况；当细胞病变达到70%时收集细胞裂解液，离心去沉淀，作为种毒保存；进行病毒的传代，传至第3代时，作为种毒扩大培养。本发明利用杆状病毒表达系统构建了含F2基因的重组杆状病毒穿梭载体，将其转染Sf9细胞后获得重组杆状病毒rBA-F2，通过间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot鉴定重组蛋白F2的表达。

公开(公告)号：CN111518777A

公开(公告)日：2020-08-11

申请号：CN202010426012.6

申请日：2020-05-19

申请人： 扬州大学

发明人： 叶建强 ,  王伟康 ,  秦爱建 ,  张伟 ,  隆玉兰 ,  谢泉 ,  张建军 ,  李拓凡 ,  万志敏 ,  邵红霞

IPC分类号： C12N7/01 ,  C12N15/34 ,  C12N15/866 ,  C12R1/93

摘要： 本发明涉及一种表达血清4型禽腺病毒纤突蛋白F1的重组杆状病毒的构建方法，包括以下步骤：（1）构建FAdV‑4‑F1基因重组杆状病毒表达载体；（2）表达重组FAdV‑4蛋白的杆状病毒包装和传代；（3）将携带有FAdV‑4‑F1基因的杆状病毒基因组转染进sf9细胞，27℃培养箱中培养5‑7天，观察细胞病变情况；当细胞病变达到70%时收集细胞裂解液，离心去沉淀，作为种毒保存；进行病毒的传代，传至第3代时，作为种毒扩大培养。本发明所述的血清4型禽腺病毒纤突蛋白F1利用该杆状病毒载体表达，且表达水平高，含有His标签，可以方便后期的纯化步骤，可以制备成禽腺病毒4型亚单位疫苗，也可以作为建立FAdV‑4酶联免疫吸附试剂制备研发中的包被用抗原。

公开(公告)号：CN108872570A

公开(公告)日：2018-11-23

申请号：CN201811100860.7

申请日：2018-09-20

申请人： 扬州大学

发明人： 叶建强 ,  鹿亚男 ,  邵红霞 ,  秦爱建 ,  王伟康 ,  董晓妹

IPC分类号： G01N33/543 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577

摘要： 本发明涉及基于Fiber1蛋白的FAdV‑4病毒检测用杂交瘤细胞株、抗体及试剂盒，属于生物技术检测技术领域。本发明提供的基于Fiber1蛋白的FAdV‑4病毒检测用杂交瘤细胞株，包括杂交瘤细胞株FAdV‑4‑F1‑3B5和杂交瘤细胞株FAdV‑4‑F1‑6H9。本发明所述杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体能够实现FAdV‑4病毒的双抗夹心高效检测，特异性强且灵敏度高，适用于临床样本中微量抗原的检测。

公开(公告)号：CN107607717A

公开(公告)日：2018-01-19

申请号：CN201710669646.2

申请日：2017-08-08

申请人： 扬州大学

发明人： 叶建强 ,  王伟康 ,  邵红霞 ,  秦爱建 ,  田晓彦 ,  梁广成 ,  万志敏

IPC分类号： G01N33/569 ,  G01N33/543 ,  G01N33/535 ,  C07K14/075 ,  C12N15/70

摘要： 本发明公开了一种基于F2蛋白的检测血清4型禽腺病毒抗体的间接ELISA试剂盒，包括包被有纤突蛋白基因F2表达产物的ELISA酶标板，阳性阴性对照，HRP标记的兔抗鸡二抗，样品稀释液、显色液以及洗涤液。本发明建立的FAdV-4抗体的间接ELISA试剂盒能特异性的检测出FAdV-4抗体，而与抗流感病毒血清(AIV)、抗马立克病毒血清(MDV)、抗新城疫病毒血清(NDV)、抗禽网状内皮组织增生症病毒血清(REV)以及SPF鸡血清不反应(图6)。因此，该试剂盒具有良好FAdV-4的特异性，能用于FAdV-4感染及免疫状况流行病学调查。

公开(公告)号：CN106018780A

公开(公告)日：2016-10-12

申请号：CN201610327488.8

申请日：2016-05-17

申请人： 扬州大学

发明人： 叶建强 ,  梁广成 ,  邵红霞 ,  王伟康 ,  秦爱建 ,  万志敏

IPC分类号： G01N33/53 ,  G01N21/64

CPC分类号： G01N33/5302 ,  G01N21/6486

摘要： 本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种基于F1蛋白的检测4型禽腺病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒。该试剂盒包括表达F1蛋白的293T细胞，FITC标记的羊抗鸡抗体，样品稀释液，洗涤液。本发明试剂盒具有良好的特异性；该试剂盒不仅能用于血清4型禽腺病毒感染状况流行病学调查，而且能有效用于监测免疫鸡群血清4型禽腺病毒抗体水平，用于评价免疫保护性抗体水平等。

公开(公告)号：CN105973854A

公开(公告)日：2016-09-28

申请号：CN201610327763.6

申请日：2016-05-17

申请人： 扬州大学

发明人： 叶建强 ,  王伟康 ,  邵红霞 ,  梁广成 ,  万志敏 ,  秦爱建

IPC分类号： G01N21/64 ,  G01N33/53

CPC分类号： G01N21/6486 ,  G01N33/5302

摘要： 本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种基于F2蛋白的检测4型禽腺病毒抗体的间接免疫荧光试剂盒。该试剂盒包括表达F2蛋白的293T细胞，FITC标记的羊抗鸡抗体，样品稀释液和洗涤液。本发明试剂盒具有良好的特异性。该试剂盒不仅能用于血清4型禽腺病毒感染状况流行病学调查，而且能有效用于监测免疫鸡群血清4型禽腺病毒抗体水平，用于评价免疫保护性抗体水平等。