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公开(公告)号：CN114736989A
公开(公告)日：2022-07-12
申请号：CN202210339139.3
申请日：2022-04-01
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种用于美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的荧光RPA检测引物、方法及试剂盒。本发明涉及了用于美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的荧光RPA检测引物和探针组合，包含引物和探针组合反应体系的检测试剂盒及方法；该方法快速省时，最低检测PRRSV载量为50copies/μL，且与常见感染猪的病毒无交叉反应，特异性好；该方法与实时荧光RT‑PCR检测结果符合率为100%。结果表明：本研究建立的PRRSV实时荧光RPA检测方法具有特异性强、敏感性高，满足美洲型PRRSV的快速诊断和流行病学调查。
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公开(公告)号：CN114438260A
公开(公告)日：2022-05-06
申请号：CN202210088957.0
申请日：2022-01-25
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明公开了猪繁殖与呼吸综合征病毒一步法多重RT‑PCR检测方法和试剂盒，建立的一步法多重RT‑PCR方法对美洲型PRRSV毒株均可以扩增出约408bp、548bp、689bp特异性条带，至少扩增出一条带，对欧洲型毒株仅扩增出约408bp条带，25μL反应体系中3对引物最佳使用量均为0.5μL(10mmol/μL)，最佳退火温度为58℃，循环数为30～35个；对美洲型毒株的检测能力不低于25～50TCID50/mL，具有良好的敏感性；该方法对感染猪的常见重要病毒均未扩增出任何片段，说明特异性良好。本发明成功建立了PRRSV的一步法多重RT‑PCR检测方法，对美洲型毒株和欧洲型毒株均具良好的敏感性和特异性，值得组装成试剂盒推广应用，这为猪繁殖与呼吸综合征的快速准确诊断提供了有效的技术方法。
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公开(公告)号：CN112725293A
公开(公告)日：2021-04-30
申请号：CN202110196505.X
申请日：2021-02-22
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N7/02 , G01N33/569 , G01N21/84 , C12R1/93
Abstract: 本发明属于病毒双水相萃取技术领域，公开了一种双水相萃取浓缩纯化猪塞内卡病毒(SenecavirusA,SVA)粒子的方法，SVA繁殖；SVA的间接免疫荧光鉴定；三步双水相萃取方法的建立；SVA含量的测定；蛋白印迹试验；SVA的电子显微镜鉴定。本发明在SVA培养液中加入低浓度的聚乙二醇和无机盐后，除去细胞碎片，再加入聚乙二醇形成双水相体系即能够快速的获得浓缩纯化的猪SVA病毒粒子；通过双水相萃取技术可实现病毒粒子的快速分离，且病毒粒子回收率和纯度均较高，工艺简单、成本低；通过三步双水相萃取的方法，实现了从细胞培养液中浓缩纯化猪SVA病毒粒子的目的，并可在实验室和规模化生产中同时应用。
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公开(公告)号：CN112358544A
公开(公告)日：2021-02-12
申请号：CN202011285447.X
申请日：2020-11-17
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C07K16/10 , G01N33/569 , G01N33/577 , G01N33/58
Abstract: 本发明提供了FMDV A型牛源广谱中和单抗W145及其制备的中和抗体竞争ELISA检测试剂盒，属于病毒抗体检测技术领域。FMDV A型牛源广谱中和单克隆抗体W145，包括氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示轻链可变区。单克隆抗体W145在制备中和FMDV A型病毒的试剂中的应用。FMDV A型牛源广谱中和单克隆抗体组合物，包括单克隆抗体W145和单克隆抗体E32，在制备基于直接竞争法检测FMDV A型中和抗体的免疫试剂盒中的应用。该试剂盒的检测结果与病毒微量中和试验结果显著相关，说明该试剂盒可用于血清中和抗体的检测。
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公开(公告)号：CN105622762B
公开(公告)日：2020-04-03
申请号：CN201610120102.6
申请日：2016-03-03
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C07K19/00 , C12N15/62 , A61K39/135 , A61P31/14
Abstract: 本发明提供一种牛趋化因子介导的O型口蹄疫靶向性复合表位蛋白，所述靶向性复合表位蛋白的氨基酸序列为序列表中SEQ ID No.2。本发明还提供含有上述牛趋化因子介导的O型口蹄疫靶向性复合表位蛋白的疫苗。应用本发明的疫苗免疫牛，牛能够产生较高的体液免疫，以及较好的保护性免疫效果，是一种安全的口蹄疫新型疫苗。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110372790A
公开(公告)日：2019-10-25
申请号：CN201910694339.9
申请日：2019-07-30
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明涉及一种跨口蹄疫病毒血清型单克隆抗体的筛选方法，属于单克隆抗体筛选技术领域。本发明利用不同荧光素标记不同的血清型抗原，借助多色流式细胞仪直接分选获得结合不同抗原的特异性B细胞，设计出一种快速获得能与不同血清型抗原反应的单克隆抗体筛选方法，能够得到可以快速产生跨血清单克隆抗体，获得该类型单克隆抗体可用于鉴定不同病毒血清型间保守抗原位点，可以为血清非依赖性ELISA检测方法的建立前提必要工具。
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公开(公告)号：CN108997493B
公开(公告)日：2019-07-09
申请号：CN201810929067.1
申请日：2018-08-15
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明涉及一种全牛源O型口蹄疫病毒广谱中和抗体的制备方法，属于抗体制备技术领域。本发明所述制备方法包括以下步骤：1)采用O型口蹄疫病毒，对牛进行第一、第二和第三次免疫；2)筛选O型口蹄疫病毒抗原特异性单个B细胞；3)扩增牛抗体重链和轻链的可变区基因；4)牛抗体重链和轻链的恒定区序列的获取；5)制备全牛源单抗的全长重链载体和全牛源单抗的全长轻链载体；6)将全牛源单抗的全长重链载体和全牛源单抗的全长轻链载体共转染细胞，取细胞培养上清，纯化得到全牛源O型口蹄疫病毒广谱中和抗体。本发明所述制备方法利用不同口蹄疫毒株感染牛，筛选得到能中和三个谱系O型FMDV的中和抗体，能够获得全牛源广谱中和单克隆抗体。
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公开(公告)号：CN108997493A
公开(公告)日：2018-12-14
申请号：CN201810929067.1
申请日：2018-08-15
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
CPC classification number: C07K16/1009 , C07K2317/76 , C12N15/85
Abstract: 本发明涉及一种全牛源O型口蹄疫病毒广谱中和抗体的制备方法，属于抗体制备技术领域。本发明所述制备方法包括以下步骤：1)采用O型口蹄疫病毒，对牛进行第一、第二和第三次免疫；2)筛选O型口蹄疫病毒抗原特异性单个B细胞；3)扩增牛抗体重链和轻链的可变区基因；4)牛抗体重链和轻链的恒定区序列的获取；5)制备全牛源单抗的全长重链载体和全牛源单抗的全长轻链载体；6)将全牛源单抗的全长重链载体和全牛源单抗的全长轻链载体共转染细胞，取细胞培养上清，纯化得到全牛源O型口蹄疫病毒广谱中和抗体。本发明所述制备方法利用不同口蹄疫毒株感染牛，筛选得到能中和三个谱系O型FMDV的中和抗体，能够获得全牛源广谱中和单克隆抗体。
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公开(公告)号：CN105777909A
公开(公告)日：2016-07-20
申请号：CN201610120101.1
申请日：2016-03-03
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C07K19/00 , C12N15/62 , A61K39/135 , A61K47/48 , A61P31/14
Abstract: 本发明提供一种猪趋化因子介导的A型口蹄疫靶向性复合表位蛋白，其氨基酸序列为序列表中SEQ ID No.2。本发明还提供包含上述猪A型口蹄疫靶向性复合表位蛋白的疫苗。应用本发明的疫苗免疫动物，一周后均可检测到FMDV特异性抗体，抗体效价不断升高，免疫四周时抗体效价最高。用1000个猪半数感染量（PID50）的A/SEA/97系HNXX株猪体适应毒攻击后，本发明的疫苗免疫组猪均可完全抵抗强毒攻击，攻毒后10天内无一头猪表现出临床症状。说明将A8抗原通过XCL1靶向XCR1受体，再用CpG激活树突状细胞能显著提高抗原的体液免疫和细胞免疫水平，因而，是一种有效的猪趋化因子介导的A型口蹄疫靶向性复合表位蛋白疫苗。
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公开(公告)号：CN105535957A
公开(公告)日：2016-05-04
申请号：CN201510917849.X
申请日：2015-12-11
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: A61K39/135 , A61K39/295 , A61K39/39 , A61P31/14
CPC classification number: A61K39/12 , A61K39/39 , A61K2039/53 , A61K2039/552 , A61K2039/70 , C12N2770/32134
Abstract: 本发明公开了一种口蹄疫O、A型双价灭活标记疫苗及其制备方法，所述标记疫苗种毒为O型口蹄疫重组病毒rV-O/3Ad和A型口蹄疫重组病毒A/rV-2，其中，所述O型口蹄疫重组病毒rV-O/3Ad的基因组序列为SEQ ID NO:2，所述O型口蹄疫重组病毒rV-O/3Ad含3A 91-114位氨基酸的缺失，并且含有缅甸98 VP1氨基酸编码序列；所述A型口蹄疫重组病毒A/rV-2的基因组序列为SEQ ID NO:4，该重组病毒含3A 104-115位氨基酸的缺失。本发明的口蹄疫O、A型双价灭活标记疫苗既可以预防O、A型口蹄疫流行毒株的攻击，又能够准确区分免疫动物和自然感染动物，在口蹄疫免疫预防与疫情控制、进出口动物及其肉制品检验检疫等领域具有重要的市场价值和指导意义。
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