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公开(公告)号：CN115927458A
公开(公告)日：2023-04-07
申请号：CN202210830662.6
申请日：2022-07-14
申请人： 肇庆大华农生物药品有限公司 , 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
摘要： 本发明属于基因工程及疫苗制备技术领域，公开了一种表达ASFV E183L基因的重组PRRSV的拯救方法和应用。所述拯救方法包括以扩增的pBR322‑CMV‑linear作为载体，segment4A、P54、segment4B作为插入片段进行同源重组，得到pBR322‑CMV‑segment4‑P54质粒；以扩增的pBR322‑CMV‑linear作为载体，PRRSV JXA1R株基因组五个PCR扩增片段作为插入片段进行同源重组，得到pBR322‑CMV‑rJXA1R‑P54质粒，然后转染细胞表达，得到重组PRRSV。本发明方法病毒拯救成功率高，可用于开发非洲猪瘟及其它猪病疫苗。
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公开(公告)号：CN115417926A
公开(公告)日：2022-12-02
申请号：CN202210350779.4
申请日：2022-04-02
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 , 广东益朗生物科技有限公司 , 华南农业大学
摘要： 本发明公开了一种大规模提取筋腱中胶原的方法及应用，首先将动物筋腱绞碎，先将动物筋腱置于碱液中浸泡，过滤，收集筋腱，重复浸泡和过滤若干次后，过滤得到含有胶原的溶液，再进行过滤，得到胶原浓缩液；在胶原浓缩液中加入缓冲液进行稀释，重复过滤稀释和浓缩步骤若干次，过滤浓缩后得到胶原溶液，再调节pH，然后进行酶解，酶解后进行过滤；再进行稀释，继续重复过滤浓缩和稀释步骤若干次，过滤后得到胶原蛋白溶液。该提取方法将碱法提取、酸法提取和酶法提取结合，能有效提取动物筋腱中的胶原蛋白且不损害有效成分，适合产业化大规模提取。利用上述提取方法得到胶原蛋白生物活性高，能够很好地促进细胞贴壁和延伸，适用于细胞培养。
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公开(公告)号：CN114703207A
公开(公告)日：2022-07-05
申请号：CN202210359526.3
申请日：2022-04-07
申请人： 华南农业大学 , 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
摘要： 本发明属于生物领域，公开了一种重组质粒的制备方法，将F1片段、F2片段、HA片段或HA‑2P片段、F4片段同源重组得到重组质粒。通过将H9N2亚型禽流感的血凝素蛋白HA茎端C环上第403位异亮氨酸、第411位缬氨酸均突变为脯氨酸，并分别将突变前后的HA基因插在rDHN3‑mF病毒基因组的P基因和M基因之间的非编码区，获得了两株能稳定表达H9N2AIV的HA蛋白的新城疫基因VII型减毒株重组病毒rDHN3mF‑HA‑2P，经WB验证表明双脯氨酸突变后的HA基因与原HA基因相比，其表达效率更高。该重组病毒有望进一步开发成抗新城疫和H9N2亚型禽流感病毒的二联疫苗。
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公开(公告)号：CN114703122A
公开(公告)日：2022-07-05
申请号：CN202210350780.7
申请日：2022-04-02
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 , 广东益朗生物科技有限公司 , 华南农业大学
IPC分类号： C12N5/071
摘要： 本发明公开了一种使PK‑15细胞形成团块和传代培养的方法，具体步骤为：先对PK‑15细胞进行复苏，再进行细胞传代，然后配制特定的悬浮培养基，将PK‑15细胞与悬浮培养基混合倒入摇瓶中，再将摇瓶置于摇床进行悬浮培养，悬浮培养一段时间后再取样观察细胞生长状况，进行细胞计数，再进行细胞传代，得到团块状细胞，继续对团块状细胞进行细胞传代；连续传代并观察PK‑15细胞状态，得到成球形团块状的PK‑15细胞。本发明的培养方法在在不进行细胞驯化和基因改造的情况下，能直接悬浮PK‑15细胞，使得PK‑15细胞形成球形团生长，球形团块直径为20～80μm，还能够连续传15代以上。
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公开(公告)号：CN112294872B
公开(公告)日：2022-05-13
申请号：CN202011201266.4
申请日：2020-11-02
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
IPC分类号： A61K36/634 , A61K47/10 , A61P1/02 , A61P31/04 , A61K33/22
摘要： 本发明涉及中药组合物制剂领域，具体而言，涉及一种有助于宠物口腔清洁的药物组合物及其制备方法。所述助于宠物口腔清洁的药物组合物，以其工作浓度计，每100L所述药物组合物包括M组分、R组分、澄明剂及水，M组分包括以下重量组分：金银花1kg～2kg、连翘1kg～2kg、薄荷0.5kg～1kg及野菊花0.5kg～1kg；R组分包括以下重量组分：硼砂0.8kg～1.2kg、矫味剂以及增稠剂。本发明制备的有助于宠物口腔清洁的药物组合物能够对宠物口腔起到良好的抑菌和清洁作用，还可以辅助治疗宠物口腔疾病。本发明还涉及所述有助于宠物口腔清洁的药物组合物的制备方法，该方法制备工艺简单，能够最大可能的保留药物组合物的药效。
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公开(公告)号：CN114028350A
公开(公告)日：2022-02-11
申请号：CN202111369823.8
申请日：2021-11-18
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
摘要： 本发明公开了一种减轻猫应激组合物，按照质量份数计包括：加巴喷丁微囊包被物130～150份，风味剂60～70份，赋形剂37～43份，粘合剂21.7～25份，润滑剂4.6～5.4份，所述加巴喷丁微囊包被物含有加巴喷丁和崩解剂。本发明还公开了一种减轻猫应激组合物的制备方法。采用本发明，能有效掩盖加巴喷丁的苦味，提高猫的适口性，减少喂药的抗拒及应激反应。
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公开(公告)号：CN113075340A
公开(公告)日：2021-07-06
申请号：CN202110527897.3
申请日：2021-05-14
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
摘要： 本发明公开了一种高效液相色谱法测定宠物血浆中米氮平浓度的方法，其包括：取盐酸丙咪嗪标准品，制备内标溶液；取米氮平标准品，制备标准溶液；取空白血浆，加入标准溶液和内标溶液，并采用溶剂提取后得到工作曲线溶液；取待测血浆，加入内标溶液，并采用溶剂提取后得到供试品溶液；然后测定。本发明中的测定方法适用于米氮平含量较低的、采样量较小的宠物血浆中米氮平含量的测定，且测试准确度高。
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公开(公告)号：CN112626123A
公开(公告)日：2021-04-09
申请号：CN202011642554.3
申请日：2020-12-31
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
摘要： 本发明属于生物领域，公开了一种重组质粒pBR322‑FDHN3‑S1，其序列如序列表SEQ ID NO：1所示。该重组质粒采用强毒性的VII亚型NDV毒株DHN3株为基础，用Lasota弱毒株的F基因替换了DHN3株的F基因，插入S1基因，针对II型、VII型新城疫和IBV具有免疫源性。同时，本发明还公开了一种重组病毒以及针对该病毒的高滴度培养方法。
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公开(公告)号：CN112553255A
公开(公告)日：2021-03-26
申请号：CN202011629469.3
申请日：2020-12-30
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
IPC分类号： C12N15/85 , C12N15/45 , C12N15/40 , C12N7/01 , A61K39/295 , A61K39/17 , A61K39/12 , A61P31/14 , C12R1/93
摘要： 本发明属于生物工程技术领域，公开了一种表达传染性法氏囊病毒VP2抗原的重组病毒及制备与应用。首先通过RT‑PCR技术获得IBDV的VP2基因片段，然后以pBR322‑mFDHN3载体为模板，用特定引物通过PCR扩增得到F1和F2基因片段，再用SmaI酶切pBR322‑mFDHN3载体得到F4基因片段；将VP2基因片段与F1、F2和F4基因片段进行同源重组，得到重组质粒，最后将重组质粒转染BHK‑21细胞，得到重组病毒。本发明载体选用的是基因VII型NDV致弱病毒，是优质的NDV疫苗候选株，且能够表达IBDVvp2蛋白，可应用于制备NDV/IBD二联活毒疫苗。
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公开(公告)号：CN112538104A
公开(公告)日：2021-03-23
申请号：CN202011395382.4
申请日：2020-12-02
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
IPC分类号： C07K14/075 , C07K1/22 , C12N15/62 , C12N15/70
摘要： 本发明属于生物工程技术领域，公开了一种构建促融质粒优化禽腺病毒Fiber‑2蛋白表达及纯化的方法。通过特定模板扩增Fiber‑2目的片段和PET‑32a‑T7‑TrxA载体片段，然后进行同源重组得到重组质粒PET‑32a‑T7‑TrxA‑Fiber2转化至Shuffle T7‑B感受态细胞进行Fiber‑2蛋白的表达，提高Fiber‑2蛋白的可溶性。并通过重组质粒上带有的his标签进行蛋白纯化并获得足够的蛋白量，为后续的亚单位疫苗的制备及免疫原性实验奠定基础。
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