公开(公告)号：CN118703654A

公开(公告)日：2024-09-27

申请号：CN202411195112.7

申请日：2024-08-29

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)

Inventor： 李坤 ,  卢曾军 ,  黄书伦 ,  张强 ,  曹轶梅 ,  李平花 ,  包慧芳 ,  孙普 ,  付元芳 ,  袁红 ,  白兴文 ,  马雪青 ,  赵志荀 ,  张婧 ,  王健 ,  李冬

IPC: C12Q1/6888 ,  C12Q1/6869 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明公开了一种基于高通量单细胞V(D)J测序的牛源TCR序列引物组及其应用。牛源TCR序列引物组的核苷酸如SEQ ID No.1~SEQ ID No.8所示。本发明提供的牛源TCR序列测序引物，可快速、高效率地获得不同组织来源的T细胞受体文库信息,包括αβ T细胞和γδ T细胞。该方法能特异性的获取配对TCR序列信息，能够更好地了解牛免疫疫苗或感染病原后的T细胞应答多样性，为生物制品的设计、优化以及效果评价等提供了重要的数据支持。

公开(公告)号：CN118580346A

公开(公告)日：2024-09-03

申请号：CN202410608239.0

申请日：2024-05-16

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)

Inventor： 曹轶梅 ,  李坤 ,  卢曾军 ,  包慧芳 ,  孙普 ,  付元芳 ,  李平花 ,  张婧 ,  马雪青 ,  赵志荀 ,  袁红 ,  王健 ,  白兴文 ,  李冬 ,  刘在新

IPC: C07K16/10 ,  A61K39/135 ,  A61K39/42 ,  A61P31/14

Abstract: 本发明提供了一种口蹄疫病毒广谱非中和抗体及其在制备增强诱导产生中和抗体的试剂中的应用，属于抗体技术领域。一种口蹄疫病毒广谱非中和抗体，重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明利用单个B细胞抗体技术筛选获得猪源广谱非中和单克隆抗体SP1C6，能够识别VP2上的构象型表位。广谱非中和抗体SP1C6通过封闭口蹄疫病毒抗原的非中和表位，从而提高口蹄疫病毒在猪体中诱导产生的中和抗体水平。

公开(公告)号：CN118344474A

公开(公告)日：2024-07-16

申请号：CN202410667691.4

申请日：2024-05-28

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)

Inventor： 李坤 ,  卢曾军 ,  李凤娟 ,  包慧芳 ,  曹轶梅 ,  李平花 ,  孙普 ,  白兴文 ,  马雪青 ,  付元芳 ,  袁红 ,  赵志荀 ,  张婧 ,  王健 ,  李冬 ,  张强

IPC: C07K16/10 ,  G01N33/577 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明公开了口蹄疫病毒O型、A型和Asia1型广谱中和性猪源单克隆抗体pOA‑6、pOA‑13和pOA‑20。pOA‑6重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示；pOA‑13的重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示；pOA‑20的重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示。本发明首次获得3株自然宿主源O型、A型和Asia1型FMDV广谱中和抗体，并鉴定其识别的关键抗原位点，为FMDV抗体药物开发和血清学检测方法建立提供了有力工具。

公开(公告)号：CN116218783A

公开(公告)日：2023-06-06

申请号：CN202310035634.X

申请日：2023-01-10

Applicant: 兰州大学 ,  中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 白兴文 ,  王利豪 ,  卢曾军 ,  袁红 ,  黄磊 ,  宫晓华 ,  刘在新 ,  李平花 ,  孙普 ,  包慧芳 ,  李冬 ,  马雪青 ,  陈应理 ,  曹轶梅 ,  付元芳 ,  杨竞纯 ,  王涛

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/54 ,  C12N9/10 ,  C12N15/867 ,  C12N7/00 ,  A61K39/135 ,  A61P31/14 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明提供了一种过表达HS3ST5基因的重组BHK‑21细胞系及其在增强病毒复制中的应用，属于基因工程技术领域。本发明提供通过将HS3ST5片段克隆到慢病毒载体中构建出重组慢病毒质粒，再经病毒拯救包装出的慢病毒，感染BHK‑21细胞，获得过表达HS3ST5的重组BHK‑21细胞系。过表达HS3ST5的重组BHK‑21细胞会促进FMDV的吸附和复制，这为病毒疫苗抗原的制备提供了有效工具，为后续研究病毒感染和防治奠定了基础。

公开(公告)号：CN115896043A

公开(公告)日：2023-04-04

申请号：CN202210793288.7

申请日：2022-07-07

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 李平花 ,  孙普 ,  查晶晶 ,  卢曾军 ,  袁红 ,  李冬 ,  包慧芳 ,  曹轶梅 ,  白兴文 ,  付元芳 ,  马雪青 ,  李坤 ,  赵志荀 ,  刘在新

IPC: C12N7/01 ,  C12N15/42 ,  C12N15/62 ,  C12N15/85 ,  A61K39/135 ,  A61P31/14 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了一种O型口蹄疫疫苗候选株及其构建方法和应用，属于生物制品技术领域。本发明利用口蹄疫病毒的反向遗传操作技术，以嵌合口蹄疫当前流行毒株O/XJ/CHA/2017L+P1基因感染性克隆为骨架，进一步用口蹄疫病毒O/SCGH/CHA/2016株的G‑H环基因替换其对等基因，构建重组病毒rHN/XJ/SCGH。和亲本病毒rHN/XJ相比，重组病毒rHN/XJ/SCGH引起100％感染细胞病变的时间缩短到12h，复制滴度显著提高，重组病毒疫苗免疫猪能够对口蹄疫O型四个谱系流行毒产生高水平、保护性的交叉中和抗体，拓展了抗原谱。因此，本发明利用反向遗传操作技术构建的重组病毒rHN/XJ/SCGH适合做FMD疫苗候选株，用于我国当前O型口蹄疫的有效防控。

公开(公告)号：CN115541877A

公开(公告)日：2022-12-30

申请号：CN202211136363.9

申请日：2022-09-19

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 付元芳 ,  包艳芳 ,  林密 ,  孙普 ,  曹轶梅 ,  何莉 ,  蒋韬 ,  卢曾军 ,  刘在新

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/535 ,  G01N33/543 ,  G01N33/577 ,  G01N21/76

Abstract: 本发明提供了一种基于管式化学发光免疫分析技术检测口蹄疫病毒非结构蛋白3ABC抗体的试剂盒及其应用，属于体外检测技术领域。本发明提供的试剂盒包括磁微粒偶联3ABC融合蛋白、酶标3A抗体、标准品、稀释液、浓缩洗涤液和发光底物。本发明所述试剂盒能检测猪、牛、羊血清中3ABC的特异性抗体，并且实现定量、自动化、高敏感性、高重复性检测，与ELISA检测试剂盒相比具有明显的优势。

公开(公告)号：CN114736989A

公开(公告)日：2022-07-12

申请号：CN202210339139.3

申请日：2022-04-01

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 孙普 ,  卢曾军 ,  王方洲 ,  张婧 ,  马雪青 ,  李平花 ,  赵志荀 ,  袁红 ,  包慧芳 ,  李冬 ,  付元芳 ,  曹轶梅 ,  李坤 ,  王健 ,  白兴文 ,  刘在新

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明公开了一种用于美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的荧光RPA检测引物、方法及试剂盒。本发明涉及了用于美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒的荧光RPA检测引物和探针组合，包含引物和探针组合反应体系的检测试剂盒及方法；该方法快速省时，最低检测PRRSV载量为50copies/μL，且与常见感染猪的病毒无交叉反应，特异性好；该方法与实时荧光RT‑PCR检测结果符合率为100%。结果表明：本研究建立的PRRSV实时荧光RPA检测方法具有特异性强、敏感性高，满足美洲型PRRSV的快速诊断和流行病学调查。

公开(公告)号：CN113336845B

公开(公告)日：2022-04-15

申请号：CN202110598030.7

申请日：2021-05-31

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 张婧 ,  卢曾军 ,  李坤 ,  曹轶梅 ,  王健 ,  魏德陇 ,  张海霞 ,  孙普 ,  付元芳 ,  白兴文 ,  刘在新

IPC: C07K16/10 ,  G01N33/543 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577

Abstract: 本发明提供了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核衣壳蛋白(N)的猪源单个B细胞抗体及竞争ELISA抗体检测试剂盒，属于病毒检测技术领域。本发明提供了PRRSVN蛋白的猪源单个B细胞抗体C8。试验表明以FMDV的3A表位单抗3A24作为包被抗体，捕获3AN融合蛋白后形成包被酶标板，以C8单抗作为检测抗体，采用竞争ELISA反应模式检测猪血清PRRSV抗体，制备的PRRSV抗体检测试剂盒，具有很好的敏感性和特异性，为PRRSV血清流行病学调查提供了一种新工具。

公开(公告)号：CN112725293A

公开(公告)日：2021-04-30

申请号：CN202110196505.X

申请日：2021-02-22

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 孙普 ,  杜平 ,  卢曾军 ,  马雪青 ,  黄嘉馨 ,  白兴文 ,  李平花 ,  付元芳 ,  张婧 ,  李坤 ,  曹轶梅 ,  包慧芳 ,  李冬 ,  刘在新

IPC: C12N7/02 ,  G01N33/569 ,  G01N21/84 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明属于病毒双水相萃取技术领域，公开了一种双水相萃取浓缩纯化猪塞内卡病毒(SenecavirusA,SVA)粒子的方法，SVA繁殖；SVA的间接免疫荧光鉴定；三步双水相萃取方法的建立；SVA含量的测定；蛋白印迹试验；SVA的电子显微镜鉴定。本发明在SVA培养液中加入低浓度的聚乙二醇和无机盐后，除去细胞碎片，再加入聚乙二醇形成双水相体系即能够快速的获得浓缩纯化的猪SVA病毒粒子；通过双水相萃取技术可实现病毒粒子的快速分离，且病毒粒子回收率和纯度均较高，工艺简单、成本低；通过三步双水相萃取的方法，实现了从细胞培养液中浓缩纯化猪SVA病毒粒子的目的，并可在实验室和规模化生产中同时应用。

公开(公告)号：CN112358544A

公开(公告)日：2021-02-12

申请号：CN202011285447.X

申请日：2020-11-17

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 曹轶梅 ,  李坤 ,  卢曾军 ,  刘在新 ,  黄娜娜 ,  朱国强 ,  刑向川 ,  白兴文 ,  包慧芳 ,  孙普 ,  付元芳 ,  李平花 ,  马雪青 ,  张婧 ,  李冬

IPC: C07K16/10 ,  G01N33/569 ,  G01N33/577 ,  G01N33/58

Abstract: 本发明提供了FMDV A型牛源广谱中和单抗W145及其制备的中和抗体竞争ELISA检测试剂盒，属于病毒抗体检测技术领域。FMDV A型牛源广谱中和单克隆抗体W145，包括氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的重链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示轻链可变区。单克隆抗体W145在制备中和FMDV A型病毒的试剂中的应用。FMDV A型牛源广谱中和单克隆抗体组合物，包括单克隆抗体W145和单克隆抗体E32，在制备基于直接竞争法检测FMDV A型中和抗体的免疫试剂盒中的应用。该试剂盒的检测结果与病毒微量中和试验结果显著相关，说明该试剂盒可用于血清中和抗体的检测。