公开(公告)号：CN116355905A

公开(公告)日：2023-06-30

申请号：CN202310323610.4

申请日：2023-03-29

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所 ,  兰州大学

Inventor： 郑海学 ,  杨帆 ,  黄梦瑶 ,  张伟 ,  冉乾东 ,  吕岳芹 ,  曹伟军 ,  朱紫祥 ,  田宏 ,  张克山 ,  何继军 ,  郭建宏

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  C07K14/47 ,  C12N7/00 ,  A61K39/135 ,  A61P31/14 ,  C12R1/93 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明属于基因工程领域，具体涉及一种促进小RNA病毒科病毒复制的BHK‑21细胞系、构建方法及应用。本发明提供了一种特异性靶向KLHL34的sgRNA，所述sgRNA能够特异性靶向KLHL34基因，结合CRISPR‑Cas9技术在BHK‑21细胞系中实现了KLHL34基因的敲除，获得的单克隆细胞系能够显著促进小RNA病毒科病毒FMDV的复制，提高FMDV疫苗的生产量和抗原产量，可作为小核糖核酸病毒科病毒疫苗尤其是FMDV疫苗的生产细胞系，具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN116445486B

公开(公告)日：2023-12-05

申请号：CN202310322418.3

申请日：2023-03-29

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 郑海学 ,  冉乾东 ,  杨帆 ,  张伟 ,  曹伟军 ,  朱紫祥 ,  范仲鑫 ,  田宏 ,  张克山 ,  何继军 ,  郭建宏

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/12 ,  C12N7/00 ,  C12N5/10 ,  A61K39/135 ,  A61K38/17 ,  A61K48/00 ,  A61P31/14 ,  C12R1/91 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明属于基因工程领域，具体涉及KLHL34敲除细胞系的构建及作为小RNA病毒科病毒疫苗生产细胞系的应用。本发明首先发现，抑制宿主细胞中KLHL34基因表达能促进小RNA病毒科病毒FMDV的复制；其次，本发明提供了一种特异性靶向KLHL34的sgRNA，所述sgRNA能够特异性靶向KLHL34基因，结合CRISPR‑Cas9技术实现了KLHL34基因的敲除，获得的单克隆细胞系能够显著促进小RNA病毒科病毒FMDV的复制，提高FMDV

公开(公告)号：CN115948466A

公开(公告)日：2023-04-11

申请号：CN202310019982.8

申请日：2023-01-06

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 郑海学 ,  张伟 ,  杨帆 ,  杨洋 ,  冉乾东 ,  齐晓兰 ,  朱紫祥 ,  邵文华 ,  王家丽 ,  曹伟军 ,  张克山 ,  田宏

IPC: C12N15/85 ,  C12N7/00 ,  A61K39/135 ,  A61P31/14 ,  C12N15/113 ,  C12N5/10 ,  C12N15/12 ,  C12R1/93 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明属于基因工程领域，具体涉及Tollip敲除细胞系的构建及作为小RNA病毒科病毒疫苗生产细胞系的应用。本发明首先发现，抑制宿主细胞中Tollip基因表达能促进小RNA病毒科病毒FMDV的复制；其次，本发明提供了一种特异性靶向Tollip的sgRNA，所述sgRNA能够特异性靶向Tollip基因，结合CRISPR‑Cas9技术实现了Tollip基因的敲除，获得的单克隆细胞系能够显著促进小RNA病毒科病毒FMDV的复制，提高FMDV疫苗的生产量和抗原表达量，可作为小核糖核酸病毒科病毒疫苗尤其是FMDV疫苗的生产细胞系，具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN115948466B

公开(公告)日：2023-11-14

申请号：CN202310019982.8

申请日：2023-01-06

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 郑海学 ,  张伟 ,  杨帆 ,  杨洋 ,  冉乾东 ,  齐晓兰 ,  朱紫祥 ,  邵文华 ,  王家丽 ,  曹伟军 ,  张克山 ,  田宏

IPC: C12N15/85 ,  C12N7/00 ,  A61K39/135 ,  A61P31/14 ,  C12N15/113 ,  C12N5/10 ,  C12N15/12 ,  C12R1/93 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明属于基因工程领域，具体涉及Tollip敲除细胞系的构建及作为小RNA病毒科病毒疫苗生产细胞系的应用。本发明首先发现，抑制宿主细胞中Tollip基因表达能促进小RNA病毒科病毒FMDV的复制；其次，本发明提供了一种特异性靶向Tollip的sgRNA，所述sgRNA能够特异性靶向Tollip基因，结合CRISPR‑Cas9技术实现了Tollip基因的敲除，获得的单克隆细胞系能够显著促进小RNA病毒科病毒FMDV的复制，提高FMDV疫苗的生产量和抗原表达量，可作为小核糖核酸病毒科病毒疫苗尤其是FMDV疫苗的生产细胞系，具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN116445486A

公开(公告)日：2023-07-18

申请号：CN202310322418.3

申请日：2023-03-29

Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所

Inventor： 郑海学 ,  冉乾东 ,  杨帆 ,  张伟 ,  曹伟军 ,  朱紫祥 ,  范仲鑫 ,  田宏 ,  张克山 ,  何继军 ,  郭建宏

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/12 ,  C12N7/00 ,  C12N5/10 ,  A61K39/135 ,  A61K38/17 ,  A61K48/00 ,  A61P31/14 ,  C12R1/91 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明属于基因工程领域，具体涉及KLHL34敲除细胞系的构建及作为小RNA病毒科病毒疫苗生产细胞系的应用。本发明首先发现，抑制宿主细胞中KLHL34基因表达能促进小RNA病毒科病毒FMDV的复制；其次，本发明提供了一种特异性靶向KLHL34的sgRNA，所述sgRNA能够特异性靶向KLHL34基因，结合CRISPR‑Cas9技术实现了KLHL34基因的敲除，获得的单克隆细胞系能够显著促进小RNA病毒科病毒FMDV的复制，提高FMDV疫苗的生产量和抗原产量，可作为小核糖核酸病毒科病毒疫苗尤其是FMDV疫苗的生产细胞系，具有广阔的应用前景。