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公开(公告)号：CN112205406A
公开(公告)日：2021-01-12
申请号：CN202011150134.3
申请日：2020-10-24
Applicant: 云南农业大学
IPC: A01N37/10 , A01N43/90 , A01N59/00 , A01N37/40 , A01N43/12 , A01N45/00 , A01N37/42 , A01N33/04 , A01N59/24 , A01N43/38 , A01G7/06 , A01G22/00 , A01P21/00
Abstract: 本发明涉及一种快速提高三七叶片皂苷含量的方法，属于医学技术领域。该方法首先配制外源物质工作液；所述的外源物质为茉莉酸甲酯、萘乙酸、6‑苄基腺嘌呤、H2O2、水杨酸、亚精胺或脱落酸；所述的外源物质工作液的溶剂为水；之后，采用配制好的工作液对三七植株叶片进行喷洒。本发明方法利用外源物质对三七叶中皂苷单体积累的诱导效应，筛选出最佳外源物质，为提高三七叶中皂苷含量，开展品质评价和质量分析提供一定的科学依据和参考。
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公开(公告)号：CN111235124A
公开(公告)日：2020-06-05
申请号：CN202010059380.1
申请日：2020-01-19
Applicant: 云南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种珠子参糖基转移酶UGTPjm2及其在制备竹节参皂苷IVa上的应用。该珠子参糖基转移酶UGTPjm2具有如SEQ ID No.1所示的氨基酸序列。本发明的珠子参糖基转移酶UGTPjm2能够在植物体外催化齐墩果酸-3-O-β-葡萄糖醛酸苷的C-28位的羧基糖基化，进而生成竹节参皂苷IVa。为竹节参皂苷IVa的人工生产提供了重要的途径。
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公开(公告)号：CN116396876A
公开(公告)日：2023-07-07
申请号：CN202310174396.0
申请日：2023-02-28
Applicant: 云南农业大学
Abstract: 本发明涉及一种生产人参皂苷Rd的酿酒酵母工程菌及其构建方法，属于分子生物学和生物工程技术领域。所述的生产人参皂苷Rd的酿酒酵母工程菌是在产原人参二醇的起始菌株ZW04BY酿酒酵母中敲除β‑葡萄糖苷酶EGH1，过表达葡萄糖磷酸变位酶1、葡萄糖磷酸变位酶2和UDP‑葡萄糖焦磷酸化酶，糖基转移酶Pn1‑31、糖基转移酶PnUGT53、糖基转移酶PnUGT50和原人参二醇合成酶PPDS。本发明获得的酿酒酵母工程菌能够利用葡萄糖发酵生产人参皂苷Rd，产量为56.68±16.21mg/L；酵母生长繁殖较快，仅需发酵罐就可以生产，为人工细胞高效合成人参皂苷Rd奠定了基础。
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公开(公告)号：CN112063647B
公开(公告)日：2023-05-02
申请号：CN202010982096.1
申请日：2020-09-17
Applicant: 云南农业大学
Abstract: 本发明公开了酿酒酵母重组菌Cuol01的构建方法、酿酒酵母重组菌Cuol02及应用，本发明通过同源重组的手段，将生产葫芦二烯醇合成途径的下游模块6个基因：tHMG1、HcCPR1、ERG1、ERG20、ERG9和HcOSC6基因均导入酿酒酵母中得到初始重组菌Cuol01，发现其可产生葫芦二烯醇；再导入甲羟戊酸途径的上游模块7个基因：ERG12、ERG13、ERG19、ERG8、IDI、tHMG1和ERG10基因的表达，得到最终重组菌Cuol02，其葫芦二烯醇产量明显提高；为人工合成达玛二烯和原人参二醇奠定了基础。
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公开(公告)号：CN111411099B
公开(公告)日：2022-09-27
申请号：CN202010408966.4
申请日：2020-05-14
Applicant: 云南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种雪胆乙酰基转移酶及其编码基因和在制备雪胆甲素中的应用，该雪胆乙酰基转移酶具有如SEQ ID No.1所示的氨基酸序列。本发明首次在雪胆中鉴定获得了雪胆甲素合成途径中的关键酶，即，雪胆乙酰基转移酶；该雪胆乙酰基转移酶能够雪胆乙素C‑25位的羟基转化为乙酰基，从而获得雪胆甲素；基于此，本发明构建了含有雪胆乙酰基转移酶编码基因的重组载体，并进一步构建了基因工程菌，利用转基因工程菌在体外表达雪胆乙酰基转移酶，经进一步对底物雪胆乙素进行催化，直接获得雪胆甲素，无需再通过种植雪胆属植物后提取雪胆甲素；为大量、快速地制备雪胆甲素提供了重要途径。
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公开(公告)号：CN110343678B
公开(公告)日：2022-09-27
申请号：CN201910508188.3
申请日：2019-06-12
Applicant: 云南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种珠子参糖基转移酶UGTPjm1基因及在制备人参皂苷Ro上的应用，珠子参糖基转移酶UGTPjm1基因的核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示。以竹节参皂苷IVa和糖基供体UDP‑葡萄糖为原料，在由珠子参糖基转移酶UGTPjm1基因编码得到的珠子参糖基转移酶的催化下，在竹节参皂苷IVa的C3位上的葡萄糖醛酸基团上再一次糖基化，生成人参皂苷Ro。本发明中人参皂苷Ro的生物合成调控基因UGTPjm1，是首次鉴定并成功验证。通过体外合成人参皂苷Ro，管理更加方便，可控性强，可以减少对原料种植的需求，节约农业用地，生产产物单一，便于后期人参皂苷Ro的分离和纯化。珠子参糖基转移酶UGTPjm1基因作为人参皂苷Ro生物合成的关键基因，还可用于珠子参等植物育种研究。
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公开(公告)号：CN112063647A
公开(公告)日：2020-12-11
申请号：CN202010982096.1
申请日：2020-09-17
Applicant: 云南农业大学
Abstract: 本发明公开了酿酒酵母重组菌Cuol01的构建方法、酿酒酵母重组菌Cuol02及应用，本发明通过同源重组的手段，将生产葫芦二烯醇合成途径的下游模块6个基因：tHMG1、HcCPR1、ERG1、ERG20、ERG9和HcOSC6基因均导入酿酒酵母中得到初始重组菌Cuol01，发现其可产生葫芦二烯醇；再导入甲羟戊酸途径的上游模块7个基因：ERG12、ERG13、ERG19、ERG8、IDI、tHMG1和ERG10基因的表达，得到最终重组菌Cuol02，其葫芦二烯醇产量明显提高；为人工合成达玛二烯和原人参二醇奠定了基础。
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公开(公告)号：CN116396876B
公开(公告)日：2024-06-21
申请号：CN202310174396.0
申请日：2023-02-28
Applicant: 云南农业大学
Abstract: 本发明涉及一种生产人参皂苷Rd的酿酒酵母工程菌及其构建方法，属于分子生物学和生物工程技术领域。所述的生产人参皂苷Rd的酿酒酵母工程菌是在产原人参二醇的起始菌株ZW04BY酿酒酵母中敲除β‑葡萄糖苷酶EGH1，过表达葡萄糖磷酸变位酶1、葡萄糖磷酸变位酶2和UDP‑葡萄糖焦磷酸化酶，糖基转移酶Pn1‑31、糖基转移酶PnUGT53、糖基转移酶PnUGT50和原人参二醇合成酶PPDS。本发明获得的酿酒酵母工程菌能够利用葡萄糖发酵生产人参皂苷Rd，产量为56.68±16.21mg/L；酵母生长繁殖较快，仅需发酵罐就可以生产，为人工细胞高效合成人参皂苷Rd奠定了基础。
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公开(公告)号：CN116064267B
公开(公告)日：2024-06-21
申请号：CN202211438823.3
申请日：2022-11-17
Applicant: 云南农业大学
Abstract: 本发明涉及一种生产人参皂苷Rg3的酿酒酵母工程菌及其构建方法，属于分子生物学和生物工程技术领域。本发明将糖基转移酶PnUGT50和糖基转移酶PnUGT31进行酵母密码子优化，分别在组合型启动子和G418抗性标签的作用下，插入ZW04BY酵母基因组的δ序列多拷贝位点，获得生产人参皂苷Rg3的酿酒酵母工程菌。本发明通过在起始菌株ZW04BY酿酒酵母中异源过表达人参皂苷Rg3通路合成的2个关键酶实现了人参皂苷Rg3在酿酒酵母中的生产，使其产量达到254.07±56.49mg/L，本发明的方法为人工细胞高效合成人参皂苷Rg3奠定了基础。
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公开(公告)号：CN116064267A
公开(公告)日：2023-05-05
申请号：CN202211438823.3
申请日：2022-11-17
Applicant: 云南农业大学
Abstract: 本发明涉及一种生产人参皂苷Rg3的酿酒酵母工程菌及其构建方法，属于分子生物学和生物工程技术领域。本发明将糖基转移酶PnUGT50和糖基转移酶PnUGT31进行酵母密码子优化，分别在组合型启动子和G418抗性标签的作用下，插入ZW04BY酵母基因组的δ序列多拷贝位点，获得生产人参皂苷Rg3的酿酒酵母工程菌。本发明通过在起始菌株ZW04BY酿酒酵母中异源过表达人参皂苷Rg3通路合成的2个关键酶实现了人参皂苷Rg3在酿酒酵母中的生产，使其产量达到254.07±56.49mg/L，本发明的方法为人工细胞高效合成人参皂苷Rg3奠定了基础。
