公开(公告)号：CN116179374A

公开(公告)日：2023-05-30

申请号：CN202211282932.0

申请日：2022-10-19

Applicant: 云南大学

Inventor： 张克勤 ,  周亮 ,  王芯 ,  何智伟

IPC: C12N1/15 ,  C12N15/80 ,  C12N15/65 ,  A01N63/30 ,  A01P5/00 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明提供了一种构建自发产生捕食器官的少孢节丛孢的方法，属于分子生物学技术领域，所述方法包括：将启动子、目的基因、GFP序列、潮霉素筛选标记和终止子依次连接后整体构建于pCE‑Zero载体，后采用引物1进行PCR扩增,得到荧光转化片段；制备少孢节丛孢原生质体，将所述荧光转化片段转化至所述少孢节丛孢原生质体中；筛选出阳性转化子。通过该方法获得的少孢节丛孢能够自发产生捕食器官，对线虫的响应大大提前，对线虫具有更好的防治效果。

公开(公告)号：CN116004700A

公开(公告)日：2023-04-25

申请号：CN202211610776.6

申请日：2022-12-12

Applicant: 云南大学

Inventor： 王芯 ,  周亮 ,  何智伟 ,  张克勤 ,  郑喜 ,  康佳磊

IPC: C12N15/80 ,  C12N15/31 ,  C12N9/22

Abstract: 本发明公开了一种基于Cas9基因的食线虫真菌基因编辑方法及其应用，涉及微生物基因工程和生物技术领域。本发明利用食线虫真菌的基因中如SEQ ID NO.1所示的外显子以及该外显子中分别如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示序列protospacer1、protospacer2，并设计SEQ ID NO.4～11所示的引物，先后构建三个载体并将三个载体引入食线虫真菌中。本发明提供了一种基于Cas9基因的食线虫真菌基因编辑方法，经本发明方法进行的基因编辑构建的菌株，可以自发产生捕器，大大提高了线虫抓捕效果。

公开(公告)号：CN116103327A

公开(公告)日：2023-05-12

申请号：CN202211339314.5

申请日：2022-10-29

Applicant: 云南大学

Inventor： 王芯 ,  周亮 ,  张克勤 ,  何智伟

IPC: C12N15/80 ,  C12N15/65 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明提供了一种少孢节丛孢菌的遗传转化筛选体系的建立方法，包括：筛选出NrsR对应的核苷酸序列；将所述NrsR的抗性基因的5’端加上启动子序列Ptef，3’端加上终止子序列Ttef，获得Ptef‑NrsR‑Ttef的DNA序列；以少孢节丛孢菌基因组为模板，PCR扩增DNA序列5’UTR和3’UTR，将DNA序列5’UTR、Ptef‑NrsR‑Ttef和3’UTR序列连接至pUC19载体，后导入少孢节丛孢菌中，筛选得到转化子；采用特异性引物对所述转化子进行验证。该方法以NrsR的抗性基因为少孢节丛孢菌的抗性筛选标记，解决了因该菌遗传转化的选择性标记不足而制约基因功能研究的问题。