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公开(公告)号：CN116334133A
公开(公告)日：2023-06-27
申请号：CN202210830659.4
申请日：2022-07-14
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司 , 肇庆大华农生物药品有限公司
摘要： 本发明属于基因工程及疫苗制备技术领域，公开了一种表达ASFV D117L基因的重组PRRSV的拯救方法和应用。所述拯救方法包括以扩增的pBR322‑CMV‑linear作为载体，segment4A、P17、segment4B作为插入片段进行同源重组，得到pBR322‑CMV‑segment4‑P17质粒；以扩增的pBR322‑CMV‑linear作为载体，PRRSV JXA1R株基因组五个PCR扩增片段作为插入片段进行同源重组，得到pBR322‑CMV‑rJXA1R‑P17质粒，然后转染细胞表达，得到重组PRRSV。本发明方法病毒拯救成功率高，可用于开发非洲猪瘟及其它猪病疫苗。
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公开(公告)号：CN115612696A
公开(公告)日：2023-01-17
申请号：CN202210770868.4
申请日：2022-06-30
申请人： 肇庆大华农生物药品有限公司 , 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
摘要： 本发明公开了一种PRRSV基因组全长cDNA全长质粒、PRRS病毒及其构建方法和应用，属于生物技术领域，以PBR322作为基础载体，包括PRRSV基因组全长cDNA序列和CMV启动子序列，bGH poly(A)signal序列，CMV启动子序列设置在PRRSV基因组全长cDNA序列的上游，bGH poly(A)signal序列设置在PRRSV基因组全长cDNA序列的下游，PRRSV基因组全长cDNA全长质粒为pBR322‑CMV‑rJXA1R，其序列如如SEQ ID No.1所示。该PRRSV基因组全长cDNA全长质粒保真度高，构建便捷效率高。
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公开(公告)号：CN115927458A
公开(公告)日：2023-04-07
申请号：CN202210830662.6
申请日：2022-07-14
申请人： 肇庆大华农生物药品有限公司 , 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
摘要： 本发明属于基因工程及疫苗制备技术领域，公开了一种表达ASFV E183L基因的重组PRRSV的拯救方法和应用。所述拯救方法包括以扩增的pBR322‑CMV‑linear作为载体，segment4A、P54、segment4B作为插入片段进行同源重组，得到pBR322‑CMV‑segment4‑P54质粒；以扩增的pBR322‑CMV‑linear作为载体，PRRSV JXA1R株基因组五个PCR扩增片段作为插入片段进行同源重组，得到pBR322‑CMV‑rJXA1R‑P54质粒，然后转染细胞表达，得到重组PRRSV。本发明方法病毒拯救成功率高，可用于开发非洲猪瘟及其它猪病疫苗。
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公开(公告)号：CN115612693A
公开(公告)日：2023-01-17
申请号：CN202210772628.8
申请日：2022-06-30
申请人： 肇庆大华农生物药品有限公司 , 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
摘要： 本发明公开了一种表达非洲猪瘟病毒p30蛋白的重组PRRSV载体、PRRSV重组病毒及其构建方法和应用，属于生物技术领域，以PBR322作为基础载体，包括PRRSV基因组全长cDNA序列和p30蛋白基因序列，PRRSV基因组全长cDNA序列如SEQ ID No.1所示，p30蛋白基因序列插入到PRRSV基因组全长cDNA序列的ORF1b和ORF2a之间的区域，在插入p30蛋白基因序列的PRRSV基因组全长cDNA序列的上游设置位于CMV启动子，即得到表达非洲猪瘟病毒p30蛋白的重组PRRSV载体。该重组载体保真度高，构建便捷效率高。
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公开(公告)号：CN116042718A
公开(公告)日：2023-05-02
申请号：CN202111261768.0
申请日：2021-10-28
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
摘要： 本发明属于生物工程技术领域，公开了一种SFV重组复制子载体表达平台的改建方法。所述改建方法包括如下步骤：分别将pSFVCs‑EGFP质粒和pSFV‑Helper1辅助质粒中的SP6启动子更换为CMV启动子，得到质粒pSFV‑EGFP‑CMV和pSFV‑Helper1‑CMV。将pSFV‑EGFP‑CMV中的模式基因EGFP更换成任意抗原基因可获得相应的，能表达特异抗原蛋白的，具自我复制能力的复制子质粒。将pSFV‑EGFP‑CMV与pSFV‑Helper1‑CMV共转染可获得重组的仅具备一代感染性的复制粒子。该系统可安全地应用一代性活病毒载体疫苗的开发以及目的蛋白的制备。
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公开(公告)号：CN112680477B
公开(公告)日：2022-09-20
申请号：CN202011629470.6
申请日：2020-12-30
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
摘要： 本发明属于生物领域，公开了一种基于无缝克隆技术的H9N2亚型禽流感病毒的拯救方法，包括如下步骤：步骤1：提取H9N2亚型禽流感病毒的RNA，并根据RNA获得病毒的cDNA；步骤2：以cDNA为模板采用8对引物扩增得到H9N2亚型禽流感病毒8个片段的PCR产物；步骤3：将PHW2000质粒进行酶切得到线性化片段；步骤4：将H9N2亚型禽流感病毒8个片段的PCR产物分别与线性化的PHW2000载体进行同源重组得到8种重组质粒；步骤5：将8种重组质粒共同转染293T及MDCK混合培养细胞，得到重组的H9N2病毒；其中，8对引物的序列分别为如序列表SEQ ID NO：2至SEQ ID NO：17所示。该方法的优势在于：操作简单、重组精确、拯救效率高。
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公开(公告)号：CN113604505A
公开(公告)日：2021-11-05
申请号：CN202110916396.4
申请日：2021-08-11
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
摘要： 本发明公开了一种pSFV‑p32病毒样颗粒的制备方法，包括：(1)构建得到pSFV‑sp6‑p32质粒；(2)将pSFV‑sp6‑p32、SFV‑helper质粒体外转录成mRNA，然后将pSFV‑sp6‑p32、SFV‑helper质粒体外转录的mRNA共电转入BHK细胞中，得到pSFV‑p32病毒样颗粒。相应的，本发明还提供上述制得的pSFV‑p32病毒样颗粒及其应用。实施本发明，通过插入非洲猪瘟p32基因，制得的pSFV‑p32病毒样颗粒能够高效表达外源蛋白p32，有利于非洲猪瘟蛋白的表达筛选和RNA疫苗研制。
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公开(公告)号：CN110592108B
公开(公告)日：2021-03-26
申请号：CN201910894754.9
申请日：2019-09-20
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
摘要： 本发明属于兽用生物制品技术领域，公开了一种针对II类VII型流行NDV株DHN3的重组克隆方法，包括如下步骤：步骤1：构建辅助质粒，所述辅助质粒为三种，辅助质粒上的目标片段分别为NP基因、P基因、L基因；步骤2：构建DHN3全基因组表达载体；将人工重组得到的DHN3全基因组重组入载体质粒中得到全基因组表达载体；DHN3全基因组的序列如序列表SEQ ID NO 1；步骤3：将三种辅助质粒和DHN3全基因组表达载体共转染BHK‑21细胞，得到含重组病毒rDHN3的病毒液；NP基因在序列表SEQ ID NO：1中位置为1‑1591nt；P基因在序列表SEQ ID NO：1中位置为1925‑3109nt；L基因在序列表SEQ ID NO：1中位置为8166‑15192nt。该方法可以成功的克隆出于原病毒株完全相同、无突变的重组病毒。
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公开(公告)号：CN110951767A
公开(公告)日：2020-04-03
申请号：CN201911379403.0
申请日：2019-12-27
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
摘要： 本发明属于生物技术领域，具体为一种具有高拷贝能力的棒状杆菌和大肠杆菌双表达载体，所述表达质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示。通过在pXMJ19载体的棒状杆菌复制子调节部位，将第1786位点的核苷酸C进行人工突变，成功获得比pXMJ19质粒拷贝能力高约12.5倍的棒状杆菌/大肠杆菌双用载体pXMJ19C1786T质粒。pXMJ19质粒在棒状杆菌的拷贝数约为20，pXMJ19C1786T质粒在棒状杆菌的拷贝数为251。同时，本发明还公开了该表达质粒的构建方法。
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公开(公告)号：CN110317778A
公开(公告)日：2019-10-11
申请号：CN201910551879.1
申请日：2019-06-25
申请人： 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
IPC分类号： C12N5/0735 , C12N5/02
摘要： 本发明属于培养基领域，具体为一种EB66细胞株悬浮生长无血清化学成分界定培养基，添加剂A中各物质在所述培养基中浓度为：胰岛素1-10mg/L；IGF-1 5-10μg/L；腐胺0.5-2mg；谷胱甘肽0.5-5mg/L；乙醇胺1-5mg/L；β-巯基乙醇10-50μM；卵磷脂1-5mg/L；维生素C 10-50mg/L；牛磺酸50-100mg/L；胆固醇2-5mg/L；谷氨酰胺3-6mM；每1L培养基中所述氨基酸混合组分添加量为1000mg-3000mg。该培养基支持EB66细胞在无血清、全悬浮的条件下快速增殖，倍增时间短。细胞呈现较高密度，同时，本发明还提供该培养基的制备方法。
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