本发明公开一种J亚群禽白血病病毒基因检测用引物组、检测方法和快速检测试剂盒，该引物组由外引物F3、外引物B3、内引物FIP和内引物BIP这四条引物组成，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1～4所示，其中，R为G或A，Y为T、U或C。本发明采用上述引物组，在优化的最佳体系下对待测样品DNA进行环介导等温扩增反应，阳性反应在琼脂糖凝胶电泳中显示梯状带，同时在反应产物中加入显色剂，阳性反应会发生明显的颜色变化。本发明的引物组和试剂盒均可高效高特异性地检测J亚群禽白血病病毒基因，在不足1h即可完成扩增反应，检测成本低、耗时短、产率高，特异性高，且阴阳性结果显色差异显著，验证率高，更加明显可靠。