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公开(公告)号：CN113186187B
公开(公告)日：2023-03-17
申请号：CN202110386494.1
申请日：2021-04-12
申请人： 华南农业大学
IPC分类号： C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/12 , C12N5/10
摘要： 本发明公开了一种基于CRSIPR技术构建14‑3‑3ε基因敲除细胞株的方法及其应用，属于生物技术领域。本发明提供一种敲除14‑3‑3ε基因的sgRNA序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明利用CRISPR‑Cas9技术首次在鸡成纤维细胞系DF‑1细胞基因组上敲除14‑3‑3ε基因，使得14‑3‑3ε蛋白的表达完全丧失，获得14‑3‑3ε敲除的DF‑1细胞株，且敲除细胞株活性、生长速度等方面均与对照细胞无明显差异，是较为理想的DF‑1敲除的细胞模型；操作简便，周期短，成本低，改造后细胞株稳定，可用于研究14‑3‑3ε蛋白的生物学功能。
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公开(公告)号：CN106674354B
公开(公告)日：2020-10-16
申请号：CN201710078269.5
申请日：2017-02-14
申请人： 华南农业大学
摘要： 本发明属于一种生物工程技术领域干扰素融合制剂鸡λ、α干扰素基因融合表达及其生产方法和临床应用。该生物工程干扰素融合制剂通过提取CEF细胞总RNA，设计特异性引物，克隆鸡λ、α干扰素基因，通过互补疏水性柔性氨基酸接头将其融合，获得完整的鸡λ、α干扰素融合基因，将其克隆至19‑T载体使其大量克隆表达成功后，再使其连接pET‑32a载体大量表达；对产物鉴定，确定其在包涵体表达后，进行变性，纯化及复性；对其抗病毒活性检测以及临床应用效果评价。本发明成功构建了重组融合鸡λ、α干扰素原核表达质粒pET32a‑chIFN‑λ+α，实现了鸡λ、α干扰素在大肠杆菌原核表达系统上1:1融合表达。
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公开(公告)号：CN106520710B
公开(公告)日：2020-01-14
申请号：CN201611065393.X
申请日：2016-11-28
申请人： 广东省农业科学院动物卫生研究所 , 华南农业大学
摘要： 本发明公开了一种表达鸭坦布苏病毒prm和E蛋白重组新城疫病毒的制备方法，包括以下步骤：1）构建致弱新城疫GM株全长质粒；2）构建表达鸭坦布苏病毒prm和E蛋白重组新城疫病毒质粒；3）拯救重组病毒aGM‑prm/E并鉴定。并公开了利用这种方法制备的病毒aGM‑prm/E，其保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC V201644。利用该病毒制备的疫苗可以预防新城疫和鸭坦布苏病毒病，并减少新城疫病毒强毒感染后排毒。
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公开(公告)号：CN108680741A
公开(公告)日：2018-10-19
申请号：CN201810265000.2
申请日：2018-03-28
申请人： 华南农业大学
IPC分类号： G01N33/558 , G01N33/569
CPC分类号： G01N33/558 , G01N33/56983
摘要： 本发明属于生物技术领域，涉及一种鸡传染性支气管炎病毒5b ELISA抗体检测试剂盒及其应用。该试剂盒包括由重组表达的IBV非结构蛋白5b包被的ELISA反应板，此外还含有稀释的IgG酶标抗体溶液、封闭液、洗涤液、样品稀释液、阳性对照样品、阴性对照样品、显色液和终止液。本发明以非结构蛋白5b作为包被抗原，成本低。本试剂盒的使用具有方便快捷、敏感性高、特异性好等优点，为IBV抗体监测、流行病学调查以及将来对IBV的疾病净化提供了一种新的有效的检测手段。
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公开(公告)号：CN105092559B
公开(公告)日：2018-01-26
申请号：CN201510511206.5
申请日：2015-08-19
申请人： 华南农业大学
IPC分类号： G01N21/65 , G01N33/569
摘要： 本发明公开了一种基于SERS的新城疫病毒检测试剂盒及其检测方法，属于光谱学和分子诊断领域。所述基于SERS的新城疫病毒检测试剂盒包括拉曼探针溶液和硝酸纤维素膜；所述的拉曼探针溶液为纳米金、3,3'‑二硫双(6‑硝基苯甲酸)双琥珀酸亚胺酯复合物与新城疫抗体偶联溶液。检测方法为在硝酸纤维素膜上滴加新城疫病毒，经过封闭和洗涤步骤后与偶联有抗体的拉曼探针孵育，在硝酸纤维素膜上形成“固相抗原‑标记抗体”半夹心结构的免疫复合物，最后对免疫复合物进行拉曼光谱检测，即可以高特异性的识别待测物的增强的拉曼分子信号。本发明涉及的检测试剂盒及其检测方法特异性强，对新城疫病毒的检测限达103PFU/mL，灵敏度高。
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公开(公告)号：CN107033245A
公开(公告)日：2017-08-11
申请号：CN201710265356.1
申请日：2017-04-21
申请人： 华南农业大学
IPC分类号： C07K16/40 , C07K16/06 , C12N15/57 , C12N15/70 , C12N9/64 , A61K39/395 , A61P31/04 , A61P31/12 , G01N33/573
CPC分类号： C07K16/40 , C07K16/065 , C07K2317/33 , C07K2317/35 , C12N9/6478 , G01N33/573 , G01N2333/96472
摘要： 本发明提供了一种鸡caspase‑1多克隆抗体的制备方法，所述制备方法是以caspase‑1重组蛋白作为抗原免疫动物而获得所述鸡caspase‑1多克隆抗体。本发明以鸡caspase‑1为研究目标，通过基因扩增，重组载体的构建、表达、纯化与鉴定，通过制备的鸡caspase‑1多克隆抗体，能特异性识别目的蛋白，从而可以深入研究鸡caspase‑1基因家族的毒理学意义以及caspase‑1基因在病毒介导的天然免疫反应机制中的扮演的角色，为新型疫苗的研究和药物的研制提供新的靶标。同时，本发明构建的原核表达载体表达重组蛋白效率高，分离纯化方法简单，成本低，周期短。
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公开(公告)号：CN106520710A
公开(公告)日：2017-03-22
申请号：CN201611065393.X
申请日：2016-11-28
申请人： 广东省农业科学院动物卫生研究所 , 华南农业大学
摘要： 本发明公开了一种表达鸭坦布苏病毒prm和E蛋白重组新城疫病毒的制备方法，包括以下步骤：1）构建致弱新城疫GM株全长质粒；2）构建表达鸭坦布苏病毒prm和E蛋白重组新城疫病毒质粒；3）拯救重组病毒aGM-prm/E并鉴定。并公开了利用这种方法制备的病毒aGM-prm/E，其保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC V201644。利用该病毒制备的疫苗可以预防新城疫和鸭坦布苏病毒病，并减少新城疫病毒强毒感染后排毒。
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公开(公告)号：CN105647945A
公开(公告)日：2016-06-08
申请号：CN201610133500.1
申请日：2016-03-09
申请人： 华南农业大学
CPC分类号： C07K14/56 , A61K38/00 , C07K14/57 , C07K2319/00 , C12N15/10 , C12N15/70 , C12N2800/101 , C12Q2525/191
摘要： 本发明公开了一种串联鸭α、γ干扰素基因及其制备方法和应用，属于生物技术领域的基因融合表达。本发明所述的串联鸭α、γ干扰素基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明还提供了串联鸭α、γ干扰素基因的制备方法，以及表达串联鸭α、γ干扰素基因的原核表达质粒pET32a-IFNα-linker-IFNγ及其制备方法，以及串联鸭α、γ干扰素基因表达的融合蛋白在制备鸭的抗病毒药物方面的应用。本发明成功构建了重组鸭α、γ干扰素原核表达质粒pET32a-IFNα-linker-IFNγ，实现了鸭IFN-α和IFN-γ基因在大肠杆菌原核表达系统上的串联表达，还可以保证两个干扰素基因以1:1的比例进行表达。
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公开(公告)号：CN105092559A
公开(公告)日：2015-11-25
申请号：CN201510511206.5
申请日：2015-08-19
申请人： 华南农业大学
IPC分类号： G01N21/65 , G01N33/569
摘要： 本发明公开了一种基于SERS的新城疫病毒检测试剂盒及其检测方法，属于光谱学和分子诊断领域。所述基于SERS的新城疫病毒检测试剂盒包括拉曼探针溶液和硝酸纤维素膜；所述的拉曼探针溶液为纳米金、3,3'-二硫双(6-硝基苯甲酸)双琥珀酸亚胺酯复合物与新城疫抗体偶联溶液。检测方法为在硝酸纤维素膜上滴加新城疫病毒，经过封闭和洗涤步骤后与偶联有抗体的拉曼探针孵育，在硝酸纤维素膜上形成“固相抗原-标记抗体”半夹心结构的免疫复合物，最后对免疫复合物进行拉曼光谱检测，即可以高特异性的识别待测物的增强的拉曼分子信号。本发明涉及的检测试剂盒及其检测方法特异性强，对新城疫病毒的检测限达103PFU/mL，灵敏度高。
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公开(公告)号：CN101220374B
公开(公告)日：2012-02-01
申请号：CN200710062631.6
申请日：2007-01-11
申请人： 华南农业大学
IPC分类号： C12N15/863 , A61K48/00 , A61K31/7088
摘要： 本发明提供了一种鸡痘病毒双基因表达载体，其具有SEQ IDNO.1所示的核苷酸序列，包括启动子P7.5、LacZ基因、位于LacZ基因上的多克隆位点、稀有酶切位点Not1、鸡痘病毒DNA同源臂F11L1和F11L2、AmpR抗性标记基因、复制起点(ori)。本发明构建的双基因表达载体，最大限度地减少了载体长度，从而可以容纳更大的外源基因；增加了可用酶切位点数量，方便克隆不同的外源基因；对插入位点Not1处的启动子不作限定，可以自由选择与外源基因搭配的启动子，从而提高了表达效率，并且，采用反式表达的方法，从而提高了外源基因的表达效率。
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