一种GFP膜型表达的载体及转染该载体的阳性细胞的分选方法
摘要:
本发明公开了一种GFP膜型表达的载体及转染该载体的阳性细胞的分选方法,所述的GFP膜型表达的载体,包括多克隆位点,多克隆位点之后依次连接有核糖体进入位点和编码绿色荧光蛋白的序列,构成多克隆位点与绿色荧光蛋白的转录双顺反子;在核糖体进入位点与编码绿色荧光蛋白的序列之间插入编码信号肽的序列,在编码绿色荧光蛋白的序列终止密码子之前加入编码疏水性跨膜区的序列。克隆入目的基因的GFP膜型表达载体转染细胞成功之后,会在细胞表面形成独特的筛选标签——膜型GFP,而没有转染成功的则不会形成。利益磁场分选结合磁珠的阳性细胞,简化了筛选步骤,可以快速有效富集阳性细胞,是一种可以高效分选出转染阳性细胞的技术手段。
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