本发明公开了一种利用LDR技术检测中国荷斯坦牛乳脂率分子标记的方法，其特征在于，步骤如下：（1）扩增用于LDR反应包含A8398G位点的片段：以中国荷斯坦牛A8398G基因组DNA为模板，在TaqDNA聚合酶、缓冲环境、Mg2+、dNTPs存在的情况下，用引物在PCR条件下进行扩增，用于LDR反应；（2）进行LDR反应：设计三条探针，然后进行LDR反应；（3）分析：LDR反应产物由ABI PRISM-377DNA测序仪检测，根据LDR产物的长度与各基因型进行关联分析。本发明的利用LDR技术检测中国荷斯坦牛乳脂率分子标记的方法，以碱基错配为基础，使用特异性探针对特定片段DNA进行识别，具有很高的准确性与其他SNP检测技术相比，LDR检测技术拥有准确度高、通用性强、通量大、操作简单、成本低等优点。