本发明公开了一种PCV2、PRV与SIV H9亚型多重SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR引物及其检测方法，SIV H9亚型引物的序列如下：上游引物P1：5′-GGAACAACGCTTACCCTG-3′；下游引物P2：5′-GAGACCATTGACAAGAGGC-3′；PRV引物的序列如下：上游引物P3：5′-GGCATCGGCGACTACCT-3′；下游引物P4：5′-CGTCGTGCAGCGTGTAGAG-3′；PCV2引物的序列如下：上游引物P5：5′-GGGCCAGAATTCAACCTTACCC-3′；下游引物P6：5′-CGCACCTTCGGATATACTGTCA-3′。本发明分别设计扩增SIV H9亚型、PCV2和PRV的特异性引物，通过三重SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测方法能够同时检测SIV H9亚型、PCV2和PRV。SIV H9亚型、PCV2和PRV同时检出的极限拷贝数分别为184拷贝/μL，207拷贝/μL，193拷贝/μL。本发明的特异性试验结果良好，只出现三个特异性的峰值，重复性试验具有很好的稳定性并且本试验的最大优势在于能够同时检测SIV H9亚型、PCV2和PRV3种DNA病毒，有利于妊娠母猪繁殖障碍性病毒的鉴别。