本发明涉及一种空壳纳米金修饰的乙酰胆碱酯酶生物传感器的制备方法，其特征在于：空壳纳米金的制备，玻碳电极的清洗活化和表征，滴涂壳聚糖溶液，在空壳纳米金溶液中浸泡12h，在L-半胱氨酸中浸泡3h，滴涂乙酰胆碱酯酶，乙酰胆碱酯酶传感器工作曲线的建立，乙酰胆碱酯酶传感器性能如准确性、稳定性和再生能力的检测，乙酰胆碱酯酶传感器对实际样品的检测。壳聚糖带有大量正电荷的氨基，通过静电作用，将纳米空壳金吸附到壳聚糖膜上。空壳纳米金能够促进电子的传递，并且拥有良好的生物兼容性，L-半胱氨酸具有巯基能稳定的固定在金纳米空壳上，并且L-半胱氨酸中的大量羧基与酶中大量氨基结合，将酶固定在电极上。使乙酰胆碱酯酶更加稳定的固定在电极上，从而使制备的电流型乙酰胆碱酯酶传感器检测时间短，灵敏度高，稳定性好，再生能力好以及可以用于实际样品的检测。