白叶枯病菌胁迫的普通野生稻SSH文库的构建方法
摘要:
本发明公开了白叶枯病菌胁迫的普通野生稻SSH文库的构建方法,该方法包括样品处理,总RNA提取、mRNA纯化、试验方和驱动子的抑制差减杂交及PCR扩增,抑制PCR产物与pMD18-T载体连接,连接产物转化、单克隆的保存等。本发明方法所构建的白叶枯病菌胁迫的普通野生稻SSH文库灵敏度高,通过了目标片段的富集作用可以确保受白叶枯病菌胁迫后低丰度表达的cDNA被检测到;该文库插入片段平均长度450bp,可一次快速获得大量普通野生稻受白叶枯病菌胁迫的差异表达ESTs,为分离克隆抗白叶枯病相关基因的全长cDNA序列提供部分序列信息,同时为生物的改良等提供了重要的理论依据;可以获得新的抗白叶枯病相关基因。
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