本发明是一种酶催化和离子交联的生物大分子水凝胶及其制备方法，该生物大分子水凝胶包括：蛋白或多肽或含有氨基酸残基的分子通过酶催化交联而成的蛋白或多肽生物大分子网络，多糖大分子通过二价离子交联而成的多糖生物大分子网络；上述两个网络之间相互贯穿，没有化学键结合，其中蛋白或多肽生物大分子含量为水凝胶干重总质量的1%-99%，多糖大分子构成的大分子网络含量为水凝胶干重总质量的1%-99%。该水凝胶具有优异的力学性能，不使用化学交联剂，制备方法简单高效，水凝胶具有良好的生物相容性和力学强度，可以蒸汽消毒，可以是湿态或干态的膜状、多孔海绵状、管状、颗粒状，用于细胞、组织培养，作为组织修复材料、组织工程支架或药物释放载体。