本发明涉及一种大孔琼脂糖微球的制备方法及产品，其特征是向琼脂糖水溶液中添加高浓度的表面活性剂使水相中形成大量胶团，然后将水相分散到油相中，利用水相中表面活性剂胶团能够吸油溶胀的特点，制备大孔琼脂糖微球。所得产品既保留了琼脂糖凝胶原有的网状凝胶孔，同时又具备数百纳米级的大孔（100-500nm）。本发明提供的大孔琼脂糖微球制备工艺简单，产品孔径可控。所得大孔琼脂糖微球在保证原有琼脂糖凝胶优良性能的基础上，孔径大大增加，是一种理想的液相色谱固定相介质和优良的固定化酶载体，特别是用作液相色谱介质时，可以在较高流速下工作，实现生物分子特别是生物大分子的快速、高效分离。