本发明涉及建立人胎盘成肌纤维母细胞的分离及鉴定方法。把胎盘胎儿面蜕膜组织机械破碎后，通过含胶原酶I的DMEM消化液消化，分离为单个核细胞，用含有10%胎牛血清的DMEM/F12培养基在37℃、5%CO2、饱和湿度下培养，诱导贴壁，48小时后全量换液，去除非贴壁细胞，添加新鲜培养基，待贴壁细胞形成单克隆后，分别培养各单克隆细胞，当细胞融合90%左右时，胰酶传代，即得成肌纤维母细胞。本发明采用细胞形态学，细胞周期，细胞表面标志物检测，细胞成脂、成骨分化能力检测，细胞多能干细胞因子检测及细胞结蛋白表达检测的组合方法鉴定所得成肌纤维母细胞。