本发明公开了一种牛布鲁氏菌间接ELISA检测试剂盒，由以下试剂构成：（1）预包被ELISA反应板，由包被液、包被抗原和封闭液构成，包被抗原为Virb8蛋白；（2）PBST洗涤液；（3）酶标二抗；（4）终止液；（5）显色液。本发明涉及的Virb8蛋白仅在布鲁氏菌感染的早期特异性表达，该蛋白对应产生的抗体处于感染早期，且产生的抗体存在时间较长，因此，克隆表达布鲁氏菌Virb8蛋白并建立相应的间接ELISA检测方法能够更特异、灵敏地判断是否存在布鲁氏菌感染和定量感染后引起的抗体滴度，可以为布鲁氏菌病的血清学早期诊断提供一种快速准确的方法，对解决大批量样品的布鲁氏菌现场检测技术具有重要的现实意义。