本发明公开了一种发酵培养基及其在制备冠菌素中的应用。本发明提供的培养基，由溶质和水组成，所述溶质及其在所述培养基中的浓度如下：甘油10-20g/L，氮源1-2g/L，磷酸二氢钾6-10g/L，硫酸镁0.1-0.2g/L和三氯化铁。本发明提供的培养基用于发酵生产冠菌素，具有如下优势：（1）以甘油作为碳源，可与其他组成成分共同灭菌，减少了对碳源进行单独灭菌的设备及将单独灭菌的碳源注入发酵罐的步骤，在保证冠菌素产量的前提下降低了对发酵设备的要求并排除了碳源注入步骤中可能出现的交叉污染；（2）大大提高了冠菌素的产量。本发明对于冠菌素的工业化发酵生产有重要的促进作用。