发明授权
CN103468664B 一种促进精氨酸脱亚氨基酶高效水溶性表达的方法
失效 - 权利终止
- 专利标题: 一种促进精氨酸脱亚氨基酶高效水溶性表达的方法
- 专利标题(英): Method for promoting efficient water-soluble expression of arginine deiminase
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申请号: CN201310473752.5申请日: 2013-10-11
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公开(公告)号: CN103468664B公开(公告)日: 2015-04-15
- 发明人: 李越中 , 王颖
- 申请人: 山东大学
- 申请人地址: 山东省济南市历城区山大南路27号
- 专利权人: 山东大学
- 当前专利权人: 山东大学
- 当前专利权人地址: 山东省济南市历城区山大南路27号
- 代理机构: 济南圣达知识产权代理有限公司
- 代理商 李健康
- 主分类号: C12N9/78
- IPC分类号: C12N9/78 ; C12N15/70 ; C12R1/40
摘要:
本发明公开了一种促进精氨酸脱亚氨基酶(ADI)高效水溶性表达的方法。是将来源于恶臭假单胞杆菌的ADI基因连接pET-30a-c(+)载体,构建重组表达质粒pET30a-ADI,并与pGro7质粒共转化入E.coliBL21(DE3)中,获得含双质粒的工程菌;将工程菌接种于含有1-10g/L D-葡萄糖的LB培养基中,并添加L-阿拉伯糖培养;当菌体培养至对数期时,再添加1-10g/L的L-精氨酸及0.1mM IPTG,在16℃,180rpm条件下诱导培养实现。本发明方法可显著提高重组ADI蛋白的水溶性产量,粗酶液活性也提高了15倍,并有效克服了重组ADI难以可溶性表达的缺陷,为工业化大规模生产瓜氨酸等应用提供了技术支持,也为其他重组蛋白的表达提供了一个新思路。
公开/授权文献
- CN103468664A 一种促进精氨酸脱亚氨基酶高效水溶性表达的方法 公开/授权日:2013-12-25