本发明公开了一种利用特定的工程菌——转化体BL21(DE3)/PET28-ASPGA生产新型内酰胺类抗生素的方法，本发明方法以SEQ ID NO：1所示的青霉素酰化酶氨基酸序列为基础，首先引入突变位点，然后反向设计出核苷酸序列并进行了优化，进而通过进行全基因合成、构建重组载体、构建出重组菌株；所构建的重组菌株经发酵、细胞破碎、分离、纯化、脱色、固定化步骤处理后，最终得到能够直接用于工业生产的新型内酰胺类抗生素固定化酶成品。本发明方法所制备的固定化酶酶活高、稳定性好、重复利用效果优良，并且能够催化多种内酰胺类抗生素的合成如阿莫西林、头孢氨苄、头孢克洛等。