本发明涉及基因工程领域，具体提供了一种可自我删除游离载体，所述游离载体的核心功能区域从5’端到3’端包括：人EF1α启动子序列，loxp序列，EGFP编码序列，来源于人β干扰素基因的S/MAR序列，SV40的PolyA序列，小鼠Oct4启动子驱动Cre基因的表达盒序列，loxp序列。利用本发明所述载体进行基因打靶细胞及动物的制备，可删除筛选标记基因且不会产生基因插入突变，消除了marker基因对邻近基因表达的影响及对机体产生的潜在生物安全隐患。