本发明涉及一种甘胆酸检测试剂及其制备和检测方法，具体涉及一种甘胆酸免疫检测试剂及其制备和检测方法，包括：抗甘胆酸特异性抗体、用于检测抗甘胆酸特异性抗体-甘胆酸复合物的指示试剂；上述抗甘胆酸特异性抗体由甘胆酸免疫原免疫动物得到。本发明的有益之处在于：本发明的甘胆酸免疫原特异性强、免疫原性高，制备出的抗甘胆酸特异性抗体特异性强、效价高，并且与常见的45种药物无任何交叉反应；含有上述抗甘胆酸特异性抗体的均相酶免疫检测试剂可以方便、快速、准确地确定样品中的甘胆酸含量，并且可以在全自动生化分析仪上同时测定多个样品，实现甘胆酸的高通量快速化测定，准确度高，特异性强，精确度和检测效率有了较大的提高。